Registro:
| Documento: | Tesis Doctoral |
| Título: | Tráfico vesicular en tripanosomátidos : evaluación funcional de la proteína Vps32 |
| Título alternativo: | Vesicular trafficking in tripanosomatids : functional analysis of Vps32 protein |
| Autor: | Barrera, Nadia Maricel |
| Editor: | Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |
| Lugar de trabajo: | CONICET. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres" (INGEBI)
|
| Fecha de defensa: | 2025-10-16 |
| Fecha en portada: | 2025 |
| Grado Obtenido: | Doctorado |
| Título Obtenido: | Doctor de la Universidad de Buenos Aires en el área de Ciencias Biológicas |
| Departamento Docente: | Departamento de Fisiología, Biología Molecular y Celular |
| Director: | Alonso, Guillermo Daniel |
| Director Asistente: | Schoijet, Alejandra Cecilia |
| Consejero: | Nadra, Alejandro Daniel |
| Jurado: | Edreira, Martín Miguel; Franchini, Gisela Raquel; Coceres, Verónica Mabel |
| Idioma: | Español |
| Palabras clave: | TRYPANOSOMA BRUCEI; TRYPANOSOMA CRUZI; ESCRT; VPS32; TRAFICO VESICULAR; ENDOCITOSISTRYPANOSOMA BRUCEI; TRYPANOSOMA CRUZI; ESCRT; VPS32; VESICULAR TRAFFICKING; ENDOCYTOSIS |
| Formato: | PDF |
| Handle: |
https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n7885_Barrera |
| PDF: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/tesis/tesis_n7885_Barrera.pdf |
| Registro: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/tesis/document/tesis_n7885_Barrera |
| Ubicación: | BIO 007885 |
| Derechos de Acceso: | Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Barrera, Nadia Maricel. (2025). Tráfico vesicular en tripanosomátidos : evaluación funcional de la proteína Vps32. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n7885_Barrera |
Resumen:
Trypanosoma brucei y Trypanosoma cruzi presentan un ciclo de vida digenético, caracterizado por la alternancia entre estadios morfológica y funcionalmente diferenciados en el vector insecto y el hospedador mamífero. Estas transiciones se llevan a cabo gracias a que estos organismos son hábiles en implementar diversos mecanismos moleculares orientados a la adaptación ambiental y al restablecimiento de la homeostasis celular, procesos fundamentales para la progresión del ciclo vital y la persistencia de la infección. Entre estos procesos, es destacable el rol esencial del tráfico vesicular tanto intracelular como extracelular. Durante la endocitosis, los endosomas tardíos (LE) compuestos por vesículas intraluminales (ILV), conocidos como cuerpos multivesiculares (MVB), desempeñan un papel en el reconocimiento y transporte de proteínas ubiquitinadas desde la superficie celular hacia el lisosoma para su degradación. Estos MVB están compuestos principalmente por proteínas que conforman el Complejo de Clasificación Endosomal Requerido para el Transporte (ESCRT, por sus siglas en inglés), el cual es clasificado en cuatro subcomplejos (0–III), siendo el ESCRT-III el más conservado entre los taxones eucariotas. Vps32, la proteína más abundante de ESCRT-III, se caracteriza por cumplir un papel relevante en la biogénesis y tráfico vesicular, como así también en la citoquinesis de Saccharomyces cerevisiae y Homo sapiens. Asimismo, en Trypanosoma brucei se han identificado ortólogos de la maquinaria ESCRT que participan en una amplia variedad de eventos de remodelación de membrana y en la endocitosis. En el presente estudio, detectamos el ortólogo de Vps32 en Trypanosoma brucei, nombrado TbVps32, y el ortólogo en Trypanosoma cruzi, nombrado TcVps32. En T. brucei, TbVps32 se localizó en asociación con compartimentos endocíticos de la vía hacia el lisosoma; asimismo, TcVps32 de T. cruzi mostró un patrón de distribución subcelular semejante, sugiriendo la posible localización en compartimentos equivalentes. Las líneas celulares que sobreexpresaban TbVps32 de manera inducible y las líneas celulares en las cuales TbVps32 había sido silenciada por RNAi, mostraron alteración del crecimiento celular y la aparición de fenotipos celulares anormales en ambos contextos. A través de ambas estrategias, detectamos que TbVps32 podría ser participe del transporte vesicular hacia el lisosoma y de la progresión del ciclo celular. Simultáneamente, la sobreexpresión constitutiva de TcVps32 de T. cruzi alteró la capacidad proliferativa los cultivos y promovió el desarrollo de fenotipos atípicos. Adicionalmente, ante la deleción de hélices específicas de la región C- terminal (CTR) de TcVps32, se evidenció el cambio de localización de la proteína y la afectación proliferativa más pronunciada de los cultivos. En base a los análisis in silico, las estructuras de TbVps32 y TcVps32 revelaron que la región N-terminal (NTR) se encuentra conservada. En cuanto a la región C-terminal (CTR), nuestros resultados nos permiten hipotetizar que esta región podría desempeñar un papel regulatorio de la actividad de Vps32, tal como ha sido reportado en otros organismos. En suma, proponemos que TbVps32 y TcVps32 forman parte de la vía endocítica y son esenciales para la supervivencia de Trypanosoma brucei y Trypanosoma cruzi.
Abstract:
Trypanosoma brucei and Trypanosoma cruzi alternate between the multiple stages in the insect vector and mammal host, requiring processes for adapting and restoring homeostasis during life cycle progression and infection. These transitions are enabled by the organisms' ability to implement diverse molecular mechanisms aimed at environmental adaptation and the reestablishment of cellular homeostasis—processes that are fundamental for life cycle progression and infection persistence. Among these processes, the essential role of both intracellular and extracellular vesicular trafficking is particularly noteworthy. During endocytosis, late endosomes (LE) composed by intralumenal vesicles (ILV), referred as the multivesicular bodies (MVB), play a role in transporting ubiquitinylated cell surface proteins to the lysosome for degradation. These MVB are mainly composed of proteins members of The Endosomal Sorting Complex Required for Transport (ESCRT), which is classified into four subcomplexes (0-III) being ESCRT- III the most conserved among eukaryotic taxa. Vps32, the most abundant protein of ESCRT- III, plays an important role in vesicle biogenesis and vesicular trafficking as well as cytokinesis in Saccharomyces cerevisiae and Homo sapiens Orthologs of the ESCRT machinery have also been identified in Trypanosoma brucei, where they participate in a wide range of membrane remodeling events and endocytosis. In the present study, we have detected the Vps32 orthologue in Trypanosoma brucei, named TbVps32, and Vps32 orthologue in Trypanosoma cruzi named TcVps32. In T. brucei, TbVps32 was localized in association with endocytic compartments; similarly, in T. cruzi, TcVps32 showed a comparable subcellular distribution pattern that could be related to the same compartments. The knockdown cell lines of TbVps32 by interference RNA and as well as HA-TbVps32 inducible over-expression cell lines, exhibited impaired cell growth and abnormal cellular phenotypes. Through both experimental strategies, we suggest that TbVps32 may play a role in vesicular transport to the lysosome and cell cycle progression. growth and promoted the development of atypical phenotypes. Removing specific C- terminal helices of TcVps32 greatly changed the localization of protein and affected cell lines proliferation. Based on in-silico analysis, the structure of TbVps32 and TcVps32 determined that N-terminal region (NTR) is conserved. Regarding the C-terminal region (CTR), our results let us hypothesize that this short region may play a general role in regulating the activity of this protein. Overall, we propose that TbVps32 and TcVps32 are both part of endocytic pathway and are essential for Trypanosoma brucei and Trypanosoma cruzi survival.
Citación:
---------- APA ----------
Barrera, Nadia Maricel. (2025). Tráfico vesicular en tripanosomátidos : evaluación funcional de la proteína Vps32. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n7885_Barrera
---------- CHICAGO ----------
Barrera, Nadia Maricel. "Tráfico vesicular en tripanosomátidos : evaluación funcional de la proteína Vps32". Tesis Doctoral, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 2025.https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n7885_Barrera
Estadísticas:
Descargas totales desde :
Descargas mensuales
https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/tesis/tesis_n7885_Barrera.pdf
