Rol de la quinasa de receptores acoplados a proteínas G (GRK)-2 en leucemia linfocítica crónica (LLC)

Cassarino, María Chiara

Registro:

Documento:	Tesis Doctoral
Título:	Rol de la quinasa de receptores acoplados a proteínas G (GRK)-2 en leucemia linfocítica crónica (LLC)
Título alternativo:	Role of G protein-coupled receptor kinase 2 (GRK2) in chronic lymphocytic leukemia (CLL)
Autor:	Cassarino, María Chiara
Editor:	Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Lugar de trabajo:	Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires - CONICET. Instituto de Medicina Experimental (IMEX)
Fecha de defensa:	2025-12-05
Fecha en portada:	2025
Grado Obtenido:	Doctorado
Título Obtenido:	Doctor de la Universidad de Buenos Aires en el área de Química Biológica
Departamento Docente:	Departamento de Química Biológica
Director:	Borge, Mercedes
Consejero:	Schattner, Mirta Ana
Jurado:	Novaro, Virginia; Levy, Estrella Mariel; Ostrowski, Matías
Idioma:	Español
Palabras clave:	LEUCEMIA LINFOCITICA CRoNICA (LLC); GRK2; ESFINGOSINA-1-FOSFATO (S1P); RECEPTOR DE ESFINGOSINA-1-FOSFATO 1 (S1PR1); MIGRACION CELULAR; ORGANOS LINFATICOS SECUNDARIOS (OLS); CELULAS B-LLC; LINFOCITOS T; MICROAMBIENTE TUMORALCHRONIC LYMPHOCYTIC LEUKEMIA (CLL); GRK2; PHINGOSINE-1-PHOSPHATE (S1P); SPHINGOSINE-1-PHOSPHATE RECEPTOR 1 (S1PR1); CELL HOMING; SECONDARY LYMPHOID ORGANS (SLO); B-CLL CELLS; T LYMPHOCYTES; TUMOR MICROENVIRONMENT
Formato:	PDF
Handle:	https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n7863_Cassarino
PDF:	https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/tesis/tesis_n7863_Cassarino.pdf
Registro:	https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/tesis/document/tesis_n7863_Cassarino
Ubicación:	QUI 007863
Derechos de Acceso:	Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Cassarino, María Chiara. (2025). Rol de la quinasa de receptores acoplados a proteínas G (GRK)-2 en leucemia linfocítica crónica (LLC). (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n7863_Cassarino

Resumen:

La progresión de la Leucemia Linfocítica Crónica (LLC) y el desarrollo de resistencia a tratamientos dependen en gran medida de señales presentes en el microambiente tumoral dentro de los órganos linfoides. GRK2 participa activamente en la recirculación de linfocitos, favoreciendo su retorno desde la sangre hacia los tejidos linfoides al promover la internalización del receptor de esfingosina-1-fosfato 1 (S1PR1) en células expuestas a altas concentraciones de S1P presentes en la circulación. En este estudio, exploramos el rol de GRK2 en LLC utilizando modelos murinos in vitro e in vivo, así como muestras primarias de pacientes. La inhibición farmacológica de GRK2 incrementó la migración de células leucémicas humanas hacia S1P e impidió la regulación negativa de S1PR1. De manera similar, la deleción de GRK2 mediante CRISPR/Cas9 en una línea celular murina derivada del modelo Eμ-TCL1 aumentó la migración hacia S1P in vitro. In vivo, estas células mostraron una localización alterada, con mayor presencia en sangre periférica y bazo, y menor localización en los folículos esplénicos. Aunque la deleción de GRK2 no afectó la proliferación in vitro, confirió una desventaja de crecimiento in vivo en un modelo murino. Por otra parte, observamos que en los linfocitos T la inhibición de GRK2 redujo la migración en respuesta a S1P, así como la activación celular y la producción de citoquinas como IL-10 e IFN-γ. En co-cultivo con células LLC, esta menor activación de linfocitos T se asoció con una disminución de la resistencia al venetoclax inducida en las células leucémicas. En conjunto, nuestros hallazgos identifican a GRK2 como un regulador clave de la localización y la interacción con el microambiente en LLC, y destacan su potencial como blanco terapéutico.

Abstract:

The progression of Chronic Lymphocytic Leukemia (CLL) and the development of treatment resistance largely depend on signals present in the tumor microenvironment within lymphoid organs. GRK2 actively participates in lymphocyte recirculation, promoting their return from the bloodstream to lymphoid tissues by inducing the internalization of the sphingosine-1-phosphate receptor 1 (S1PR1) in cells exposed to the high S1P concentrations present in the circulation. In this study, we explored the role of GRK2 in CLL using both in vitro and in vivo murine models, as well as primary patient samples. Pharmacological inhibition of GRK2 increased the migration of human leukemic cells towards S1P and prevented the downregulation of S1PR1. Similarly, CRISPR/Cas9-mediated deletion of GRK2 in a murine cell line derived from the Eμ-TCL1 model enhanced S1P-directed migration in vitro. In vivo, these cells exhibited altered localization, with increased presence in peripheral blood and spleen, and reduced localization in splenic follicles. Although GRK2 deletion did not affect in vitro proliferation, it conferred a growth disadvantage in murine models. Additionally, we observed that GRK2 inhibition in T lymphocytes reduced their migration in response to S1P, their activation, and the production of cytokines such as IL-10 and IFN-γ. In co-culture with CLL cells, this reduced T cell activation was associated with decreased therapy-induced resistance in leukemic cells. These findings underscore GRK2 as a critical regulator of the localization of CLL cells in vivo and suggest its potential as a therapeutic target.

Citación:

---------- APA ----------

Cassarino, María Chiara. (2025). Rol de la quinasa de receptores acoplados a proteínas G (GRK)-2 en leucemia linfocítica crónica (LLC). (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n7863_Cassarino

---------- CHICAGO ----------

Cassarino, María Chiara. "Rol de la quinasa de receptores acoplados a proteínas G (GRK)-2 en leucemia linfocítica crónica (LLC)". Tesis Doctoral, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 2025.https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n7863_Cassarino

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