Registro:
| Documento: | Tesis Doctoral |
| Título: | Estudio molecular y funcional de la regulación del gen de Pomc en neuronas hipotalámicas y en corticotropos hipofisarios |
| Título alternativo: | Molecular and functional study of the Pomc gene regulation in hypothalamic neurons and pituitary corticotrophs |
| Autor: | Soria, María Agustina |
| Editor: | Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |
| Lugar de trabajo: | CONICET. Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología Molecular "Dr. Héctor N. Torres" (INGEBI)
|
| Fecha de defensa: | 2024-05-27 |
| Fecha en portada: | 2024 |
| Grado Obtenido: | Doctorado |
| Título Obtenido: | Doctor de la Universidad de Buenos Aires en el área de Ciencias Biológicas |
| Departamento Docente: | Departamento de Fisiología, Biología Molecular y Celular |
| Director: | Rubinstein, Marcelo |
| Consejero: | Katz, Eleonora |
| Jurado: | Rey, Rodolfo Alberto; Schor, Ignacio Esteban; Díaz-Torga, Graciela |
| Idioma: | Español |
| Palabras clave: | PROOPIOMELANOCORTINA; ENHANCER; HIPOFISIS; HIPOTALAMO; REGULACION TRANSCRIPCIONAL; -7 kb; ESTRESPROOPIOMELANOCORTIN; ENHANCER; PITUITARY; HYPOTHALAMUS; TRANSCRIPTIONAL REGULATION; -7 kb; STRESS |
| Formato: | PDF |
| Handle: |
https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n7524_Soria |
| PDF: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/tesis/tesis_n7524_Soria.pdf |
| Registro: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/tesis/document/tesis_n7524_Soria |
| Ubicación: | BIO 007524 |
| Derechos de Acceso: | Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Soria, María Agustina. (2024). Estudio molecular y funcional de la regulación del gen de Pomc en neuronas hipotalámicas y en corticotropos hipofisarios. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n7524_Soria |
Resumen:
El gen de proopiomelanocortina (POMC) codifica para un precursor multipeptídico que a través de un procesamiento post traduccional tejido específico da lugar a una variedad de hormonas y neuropéptidos biológicamente activos. El precursor es sintetizado principalmente en las corticotropos y melanotropos de la hipófisis y en neuronas del núcleo arcuato del hipotálamo. La expresión diferencial del gen, en distintos grupos celulares, depende de repertorios específicos de factores de transcripción que reconocen secuencias presentes en distintos enhancers. Se ha identificado una región que actúa como enhancer de POMC en corticotropos hipofisarios, ubicada a -7 kb del sitio de inicio de la transcripción del gen. Sin embargo, aún se desconoce su función in vivo. Para caracterizar la importancia funcional del enhancer -7 kb en la expresión espacio-temporal de Pomc en la hipófisis y el hipotálamo, y sus implicancias fisiológicas, generamos un modelo de ratón mutante deficiente en esta región, utilizando la tecnología de edición génica CRISPR/Cas9. En primer lugar, observamos que la región -7 kb actúa como enhancer de Pomc en corticotropos de ratones, desde el desarrollo temprano hasta la adultez. En ratones PomcΔ-7/ Δ-7, los niveles de mRNA, el número de células inmunomarcadas en el lóbulo anterior de la hipófisis y la intensidad de fluorescencia se vieron reducidos respecto a sus herman.s Pomc+/+. Los ratones mutantes presentaron un menor desarrollo del área fasciculada de la glándula adrenal. No obstante, no se evidenciaron diferencias en los niveles de corticosterona en plasma ni tests conductuales que evalúan el impacto de estresores. También, observamos que ratones adultos deficientes en el enhancer -7 kb presentan menos neuronas inmunomarcadas POMC+ en el hipotálamo. Estudios en ratones transgénicos, generados en esta Tesis Doctoral, demuestran que la región -7kb tiene la capacidad de dirigir fuertemente la expresión de un gen reportero a melanotropos hipofisarios y, en menor medida, a corticotropos. En conjunto, nuestros resultados demuestran que la región -7 kb cumple un papel crítico en la expresión corticotrópica y melanotrópica de Pomc y posiblemente como facilitador o inhibidor facultativo en neuronas hipotalámicas.
Abstract:
The proopiomelanocortin gene (POMC) encodes for a multipeptide precursor that through tissue-specific post-translational processing gives rise to a variety of biologically active hormones and neuropeptides. The precursor is synthesized mainly in pituitary corticotrophs and melanotrophs and in neurons of the arcuate nucleus of the hypothalamus. Differential gene expression in different cell groups depends on specific repertoires of transcription factors that recognise sequences present in diverse transcriptional enhancers. A region has been identified as a transcriptional enhancer of POMC in pituitary corticotrophs, located -7 kb from the transcriptional start site of the gene. However, its function in vivo is still unknown. To characterize the functional significance of the -7 kb enhancer in the spatio-temporal expression of Pomc in the pituitary and hypothalamus, and its physiological implications, we generated a mutant mouse model deficient in this region, using CRISPR/Cas9 gene editing technology. Firstly, we observed that the -7 kb region acts as an enhancer of Pomc in mouse corticotrophs from early development to adulthood. In PomcΔ-7/Δ-7 mice, mRNA levels, the number of immunolabeled cells in the anterior lobe of the pituitary and fluorescence intensity were reduced compared to their Pomc+/+ siblings. Secondly, the mutant mice showed less development of the fasciculated area of the adrenal gland. However, there were no differences in plasma corticosterone levels or in the parameters measured to assess stress. Finally, we observed that, in adult, -7 kb contributes weakly to Pomc expression in the hypothalamus. There was a reduction in the number of immune labeled neurons in mutant mice, of both sexes, compared to their control siblings. However, the body weight of these animals was not altered. Our results demonstrate that the -7 kb site of the Pomc TSS plays a pivotal role in tissue-specific expression of the gene, acting as a transcriptional enhancer in corticotrophs of the anterior lobe of the pituitary and possibly as a facilitator in hypothalamic neurons.
Citación:
---------- APA ----------
Soria, María Agustina. (2024). Estudio molecular y funcional de la regulación del gen de Pomc en neuronas hipotalámicas y en corticotropos hipofisarios. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n7524_Soria
---------- CHICAGO ----------
Soria, María Agustina. "Estudio molecular y funcional de la regulación del gen de Pomc en neuronas hipotalámicas y en corticotropos hipofisarios". Tesis Doctoral, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 2024.https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n7524_Soria
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