Registro:
Documento: | Tesis Doctoral |
Título: | Estudio de las Vesículas Extracelulares derivadas de células dendríticas estimuladas con el Virus de la Fiebre Aftosa en su forma inactivada y su participación en la modulación de la respuesta inmune anti-viral : implicancias para el diseño racional de nuevas vacunas contra la Fiebre Aftosa |
Título alternativo: | The role of extracellular vesicles derived from dendritic cells stimulated with inactivated foot-and-mouth disease virus in modulating the antiviral immune response : implications for the rational design of new foot-and-mouth disease vaccines |
Autor: | Menay, Florencia |
Editor: | Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |
Lugar de trabajo: | Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria - CONICET. Instituto de Virología e Innovaciones Tecnológicas (IVIT)
|
Fecha de defensa: | 2022-04-22 |
Fecha en portada: | Marzo 2022 |
Grado Obtenido: | Doctorado |
Título Obtenido: | Doctor de la Universidad de Buenos Aires en el área de Química Biológica |
Departamento Docente: | Departamento de Química Biológica |
Director: | Mongini, Claudia |
Consejero: | Scolaro, Luis Alberto |
Jurado: | Alvarez, Elida María del Carmen; Cremaschi, Graciela A.; Dus Santos, María José |
Idioma: | Español |
Palabras clave: | VESICULAS EXTRACELULARES; VIRUS DE LA FIEBRE AFTOSA; RESPUESTA INMUNE ANTIVIRAL; CELULAS DENDRITICAS ; LINFOCITOS B; CELULA PRESENTADORA DE ANTIGENOEXTRACELLULAR VESICLES; FOOT AND MOUTH DISEASE VIRUS; ANTIVIRAL IMMUNE RESPONSE; DENDRITIC CELLS; B LYMPHOCYTES; ANTIGEN PRESENTING CELL |
Formato: | PDF |
Handle: |
http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n7164_Menay |
PDF: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/tesis/tesis_n7164_Menay.pdf |
Registro: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/tesis/document/tesis_n7164_Menay |
Ubicación: | QUI 007164 |
Derechos de Acceso: | Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Menay, Florencia. (2022). Estudio de las Vesículas Extracelulares derivadas de células dendríticas estimuladas con el Virus de la Fiebre Aftosa en su forma inactivada y su participación en la modulación de la respuesta inmune anti-viral : implicancias para el diseño racional de nuevas vacunas contra la Fiebre Aftosa. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales). Recuperado de http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n7164_Menay |
Resumen:
La fiebre aftosa es una infección de importancia económica a nivel mundial causada por el virus de la fiebre aftosa (VFA) que afecta a animales de pezuña hendida. Hoy, la principal estrategia de prevención y control para esta enfermedad es la vacunación con el virus inactivado químicamente con etilenimida binaria (VFAi). Tanto en la infección con VFA como en la vacunación, la respuesta de los linfocitos B (LB) desempeña un papel importante al proporcionar anticuerpos neutralizantes/protectores. La respuesta de linfocitos T (LT), por otra parte, también es fundamental y participa en generación de anticuerpos a largo plazo, mediante la colaboración con los LB. Las vesículas extracelulares (VEs) y en particular las pequeñas VEs (pVEs) como los exosomas tienen un rol muy importante en la comunicación celular. Dependiendo de las moléculas de membrana expresadas y de su contenido intraluminal pueden modular el sistema inmune activando o inhibiendo una respuesta inmune. Las VEs secretadas por las células dendríticas (CDs) expresan moléculas inmunomoduladoras que participan en la activación de los linfocitos. Pueden presentar antígenos nativos asociados a la membrana (activando a los LB) o transferir péptidos asociados a moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad (CMH), e incluso antígenos completos, activando a otras CDs y participando en la activación de LT. El objetivo del presente trabajo de tesis fue aislar, caracterizar y evaluar las propiedades inmunológicas de las VEs derivadas de CDs pulsadas con el antígeno vacunal VFAi de la cepa O1 Campos. Como primera instancia, utilizando un modelo murino, se diferenciaron CDs a partir de precursores de médula ósea. Al día 8 se obtuvieron CDs con un fenotipo concordante con las CDs convencionales/inflamatorias que expresan CD11c y CMH-II, y que son capaces de interaccionar con el VFAi internalizándolo. Esta interacción desencadena la activación de las CDs reflejada en un aumento de los marcadores de maduración como el CMH-II y CD86. A partir de estas células se aislaron pVEs que expresaban los marcadores clásicos de VEs cómo CD9, CD81, CD63, y también las moléculas del CMH-II y CD86. Presentaban, además, la morfología característica descripta para exosomas con un tamaño promedio de 155 nm. Interesantemente, estas VEs expresaban proteínas/péptidos virales de VFA (pVEs-VFAi) que fueron detectadas por citometría de flujo. La secreción de estas pVEs-VFAi es acotada en el tiempo y solo se logró aislarlas dentro de las primeras 24 h post-activación. Al evaluar la función inmunomoduladora de las pVEs-VFAi, se demostró que inducían la proliferación específica de LB in vitro. Las subpoblaciones de linfocitos CD21+CD23- (linfocitos B de la zona marginal, BZM) y CD21+CD23+ (LB foliculares, LBf) estaban involucradas en esa proliferación. La activación B se desencadenaría por el reconocimiento específico de epítopes virales en la membrana de las pVEs-VFAi. También se observó una expansión de LT, dada por la presencia de las pVEs. Esta activación se induciría a través de una presentación directa por parte de péptidos virales unidos al CMH de las pVEs-VFAi o por una activación indirecta independiente del antígeno. Tanto para los LB como LT la estimulación inducida por las pVEs-VFAi fue mayor en aquellos esplenocitos que previamente habían tenido contacto con el antígeno viral in vivo. En conclusión, nuestros resultados revelaron que las pVEs-VFAi presentan antígenos que podrían estar en conformación nativa o parcialmente procesada. Estos péptidos pueden ser reconocidos por el BCR y así estimular la respuesta específica de LB contra el VFA. Además, las pVEs-VFAi también tienen un efecto directo o indirecto sobre los LT que podría favorecer la activación de los LB indicando que las pVEs-VFAi podrían expresar epítopes tanto B como T. En este trabajo de tesis se demuestra por primera vez que las CDs activadas con el antígeno vacunal VFAi O1 Campos secretan pVEs que poseen proteínas/péptidos virales que son capaces de estimular una respuesta inmune específica para VFA. Este trabajo profundiza el rol de las CDs en la generación de la respuesta inmune frente al antígeno vacunal de VFAi y propone a las pVEs derivadas de CDs como un nuevo protagonista de la respuesta inmune generada con la vacuna. Nuestros resultados ayudan a comprender mejor los mecanismos inmunes que se desencadenan luego de la vacunación y podrían colaborar con el diseño racional de nuevas plataformas vacunales.
Abstract:
Foot-and-mouth disease (FMD) is a globally and economically important infection caused by the foot-and-mouth disease virus (FMDV) that affects cloven-hoofed animals. Today, the main prevention and control strategy for this disease is vaccination with a binary-ethylenimide inactivated virus (VFAi). In both FMDV infection and vaccination, B cells response plays an important role in providing neutralizing antibodies. T cells response, on the other hand, is also critical and participates in a long-term antibody generation by collaborating with B cells. Extracellular vehicles (EVs) and small EVs (pVEs) such as exosomes, have an important role in cellular communication. Depending on the membrane molecules expressed and their intraluminal content they can regulate the immune system by activating or inhibiting an immune response. EVs secreted by dendritic cells (DCs) express immunomodulatory molecules involved in lymphocyte activation. They can present native membrane-associated antigens to B cells or transfer peptides associated with major histocompatibility complex (MHC), molecules and even complete antigens to DCs, consequently participating in T cells activation. The aim of this thesis was to isolate, characterize and evaluate the immunological properties of EVs derived from DCs pulsed with the FMDVi O1 Campos vaccine-antigen. As a starting point, DCs were differentiated from murine bone marrow precursors. DCs with a phenotype concordant with conventional/inflammatory DCs expressing CD11c and MHC-II were obtained at day 8. These cells interact with the FMDVi by internalizing it. This interaction triggers the activation of DCs reflected by an increase in maturation markers such as MHC-II and CD86. From these cells, pVEs expressing classical pVEs markers (CD9, CD81, CD63), MHC-II and CD86 molecules, were isolated. They also displayed the morphology described for exosomes with an average size of 155 nm. Interestingly, these EVs expressed FMDV viral proteins/peptides (pVEs-VFAi) that were detected by flow cytometry. The secretion of these pVEs-VFAi is time-dependent and they were only isolated within the first 24 h post-activation. When assessing the immunomodulatory function of pVEs-VFAi, it was shown that they induce B cells specific proliferation in vitro. This proliferation comprised CD21+CD23- (marginal zone B cells, BZM) and CD21+CD23+ (follicular B cells, LBf) cell subpopulations. B cells activation would be triggered by specific recognition of viral epitopes on the membrane of pVEs-VFAi. An expansion of T cells induced by pVEs was also observed. This activation would be elicited by a direct presentation of viral peptides bound to the MHC molecules expressed on pVEs-VFAi or by an indirect antigen-independent stimulation. B and T cell expansion induced by pVEs-VFAi was greater in those splenocytes that had previous contact with viral antigens in vivo. Our results revealed that pVEs-VFAi express antigens that could be in native or partially processed conformation. These peptides can be recognized by the BCR and thus stimulate the specific B cells response against FMDV, involving MZB and Fo B cells. In addition, pVEs-VFAi also have a direct or indirect effect on T cells that could favor B cells activation, indicating that pVEs-VFAi could express both B and T epitopes. In this thesis we demonstrated for the first time that DCs activated with the FMDVi O1 Campos vaccine-antigen secrete pVEs expressing viral proteins/peptides that stimulate FMDV-specific immune response. This work expands the current knowledge of the role of DCs in the antiviral immune response, proposing pVEs derived from these cells as a new player in regulating the adaptative immunity against FMDV. Our results help to better understand the immune mechanisms triggered after vaccination and could contribute to the rational design of new vaccine platforms.
Citación:
---------- APA ----------
Menay, Florencia. (2022). Estudio de las Vesículas Extracelulares derivadas de células dendríticas estimuladas con el Virus de la Fiebre Aftosa en su forma inactivada y su participación en la modulación de la respuesta inmune anti-viral : implicancias para el diseño racional de nuevas vacunas contra la Fiebre Aftosa. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n7164_Menay
---------- CHICAGO ----------
Menay, Florencia. "Estudio de las Vesículas Extracelulares derivadas de células dendríticas estimuladas con el Virus de la Fiebre Aftosa en su forma inactivada y su participación en la modulación de la respuesta inmune anti-viral : implicancias para el diseño racional de nuevas vacunas contra la Fiebre Aftosa". Tesis Doctoral, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 2022.https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n7164_Menay
Estadísticas:
Descargas totales desde :
Descargas mensuales
https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/tesis/tesis_n7164_Menay.pdf