Técnicas avanzadas de microscopía de fluorescencia aplicadas al estudio cuantitativo de la dinámica intracelular

Gabriel, Manuela Virginia

Registro:

Documento:	Tesis Doctoral
Título:	Técnicas avanzadas de microscopía de fluorescencia aplicadas al estudio cuantitativo de la dinámica intracelular
Título alternativo:	Advanced microscopy fluorescence techniques applied to the quantitative study of intracellular dynamics
Autor:	Gabriel, Manuela Virginia
Editor:	Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Filiación:	Universidad de Buenos Aires - CONICET. Instituto de Física de Buenos Aires (IFIBA). Laboratorio de Electrónica Cuántica
Publicación en la Web:	2022-03-29
Fecha de defensa:	2019-12-20
Fecha en portada:	2019
Grado Obtenido:	Doctorado
Título Obtenido:	Doctor de la Universidad de Buenos Aires en el área de Ciencias Físicas
Director:	Estrada, Laura
Consejero:	Otero y Garzón, Gustavo Javier
Jurado:	Colman Lerner, Alejandro Ariel; Alvarez, Diego; Bilmes, Gabriel M.
Idioma:	Español
Formato:	PDF
Handle:	http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n6892_Gabriel
PDF:	https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/tesis/tesis_n6892_Gabriel.pdf
Registro:	https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/tesis/document/tesis_n6892_Gabriel
Ubicación:	Dep.FIS 006892
Derechos de Acceso:	Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Gabriel, Manuela Virginia. (2019). Técnicas avanzadas de microscopía de fluorescencia aplicadas al estudio cuantitativo de la dinámica intracelular. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n6892_Gabriel

Resumen:

En esta tesis se aplican técnicas avanzadas de microscopía de fluorescencia para el estudio de la dinámica intracelular en dos sistemas de relevancia biológica diferentes. Por un lado, se implementó la técnica de seguimiento de partículas únicas por barrido láser orbital combinada con el uso de nanopartículas metálicas como sondas alternativas para estudiar la endocitosis y el movimiento de vesículas en células cromafines neuroendocrinas. La dinámica vesicular extraída de las trayectorias individuales muestra la existencia de un movimiento activo dependiente de la vía de internalización y de los cambios de potenciales de acción en la célula. La implementación de esta técnica requirió el diseño, ensamblaje, y caracterización de un microscopio por absorción de 2 fotones el cual actualmente está disponible y es utilizado diariamente en el laboratorio. Por otro lado, se pusieron a punto novedosas técnicas de correlación de imágenes de fluorescencia para estudiar la dinámica de la proteína cápside de los virus de Dengue y Zika. Estos experimentos permitieron obtener mapas de flujo molecular que revelaron diferencias sustanciales en la interacción de la proteína viral con las interfaces del núcleo y nucleolo para cada virus. Finalmente, la construcción y puesta en funcionamiento de un microscopio por absorción de dos fotones que tiene la característica única de realizar barridos completamente arbitrarios del haz de excitación, permitió su utilización como plataforma para la fabricación de microestructuras en tres dimensiones por fotolitografía óptica directa.

Abstract:

This work aims to apply advanced fluorescence microscopy techniques for the study of intracellular dynamics in two relevant biological systems. On one hand, the orbital-scanning single particle tracking technique was implemented in combination with metallic nanoparticles as alternative labels to study endocytosis and mobility of vesicles in chromaffin neuroendocrine cells. The vesicular dynamics obtained from the individual trajectories reveal an active motion that is dependent on the internalization way and changes of action potentials in the cell. The implementation of this technique required the design, assembly and characterization of a two photon microscope that is currently available and daily used in the laboratory. On the other hand, fluorescence image correlation techniques were applied to capsid protein dynamics in Dengue and Zika viruses. These experiments resulted in molecular connectivity maps that show substantial differences in the interaction of the viral protein with nucleus and nucleolus interfaces for each virus. These projects involved the construction and set up of a two-photon absorption microscope that gave rise to a project of optic lithography that allows printing arbitrary shapes in three dimensions with multiple applications.

Citación:

---------- APA ----------

Gabriel, Manuela Virginia. (2019). Técnicas avanzadas de microscopía de fluorescencia aplicadas al estudio cuantitativo de la dinámica intracelular. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n6892_Gabriel

---------- CHICAGO ----------

Gabriel, Manuela Virginia. "Técnicas avanzadas de microscopía de fluorescencia aplicadas al estudio cuantitativo de la dinámica intracelular". Tesis Doctoral, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 2019.https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n6892_Gabriel

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