Registro:
| Documento: | Tesis Doctoral |
| Disciplina: | quimica |
| Título: | Estudios de estructuras de ARN que regulan la replicación del virus del dengue en humanos y mosquitos |
| Título alternativo: | Studies of RNA structures that regulate dengue virus replication in human and mosquitoes |
| Autor: | Villordo, Sergio Manuel |
| Editor: | Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |
| Filiación: | Departamento de Química Biológica
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| Publicación en la Web: | 2016-09-02 |
| Fecha de defensa: | 2016-04-11 |
| Fecha en portada: | 2015 |
| Grado Obtenido: | Doctorado |
| Título Obtenido: | Doctor de la Universidad de Buenos Aires en el área de Química Biológica |
| Director: | Gamarnik, Andrea |
| Consejero: | Damonte, Elsa Beatriz |
| Jurado: | García, Cybele Carina |
| Idioma: | Español |
| Palabras clave: | DENGUE; FLAVIVIRUS; ARN; ESTRUCTURA SECUNDARIA DE ARN; REPLICACION VIRAL; SINTESIS DE ARN VIRAL; CONSERVACION DE ESTRUCTURAS DE ARN; INTERACCION VIRUS-CELULADENGUE; FLAVIVIRUS; RNA; SECONDARY RNA STRUCTURE; VIRAL REPLICATION; RNA SYNTHESIS; RNA STRUCTURE CONSERVATION; VIRUS-HOST INTERACTION |
| Tema: | biología/evolución
biología/biología molecular y celular
biología/virología
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| Formato: | PDF |
| Handle: |
http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n6001_Villordo |
| PDF: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/tesis/tesis_n6001_Villordo.pdf |
| Registro: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/tesis/document/tesis_n6001_Villordo |
| Ubicación: | Dep.QUI 006001 |
| Derechos de Acceso: | Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Villordo, Sergio Manuel. (2015). Estudios de estructuras de ARN que regulan la replicación del virus del dengue en humanos y mosquitos. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n6001_Villordo |
Resumen:
El virus de dengue es el principal patógeno humano transmitido por mosquitos para el cualaún no existen tratamientos antivirales efectivos. El genoma viral es una molécula de ARNcompuesta por un único marco de lectura abierto flanqueado por las regiones 5' y 3' nocodificantes. Mediante la manipulación genética de clones infecciosos y ensayos funcionaleshemos, demostrado que la estructura del ARN en los extremos del genoma es dinámica yque la formación regulada de conformaciones alternativas es necesaria para la síntesis del ARN viral en células de mamíferos. Experimentos complementarios en células de mosquitoconfirmaron además la importancia de este fenómeno en ambos hospedadores y permitierondetectar una secuencia en el extremo 3' del genoma que funciona como un determinanteespecífico para la replicación del virus en insectos. Por otro lado, la combinación de estudiosde mapeo químico y análisis de conservación de la región 3' no codificante han revelado laexistencia de estructuras de ARN que se mantienen conservadas entre distintos flavivirustransmitidos por insectos. El análisis de esta región mediante experimentos de adaptación encélulas y técnicas de secuenciación masiva ha permitido caracterizar una estructura de ARNque se adapta de manera diferencial durante la infección en mosquitos y mamíferos. Ademása través de ensayos de mutagénesis dirigida y el estudio del fitness viral en células ymosquitos adultos se demostró que la duplicación de dicha estructura facilita la alternanciade hospedadores con requerimientos diferentes. En conjunto los resultados de esta tesisproveen nuevos conocimientos sobre la biología del dengue de posible utilidad para eldesarrollo racional de estrategias antivirales. Asimismo, la información aquí presentadapermitirá entender aspectos epidemiológicos y evolutivos de virus de ARN transmitidos porinsectos con relevancia en salud pública.
Abstract:
Dengue virus is the most important mosquito-borne human pathogen for which thereare no vaccines and no effective antiviral treatments available. The viral genome is an RNAmolecule coding for a single open reading frame flanked by highly structured 5' and 3' noncoding regions. Using infectious clones and evaluating replication of recombinant viruses, wehave demonstrated that the ends of the viral genome are dynamic and that the regulation ofalternative conformations of the viral RNA is crucial for infectivity. Additional experimentsusing mosquito cells confirmed the relevance of our findings for mosquito and human hosts,and allowed the identification of specific sequence requirements for viral replication in insects. Furthermore, by combining chemical probing and sequence conservation analysis of viral 3'non coding regions, the existence of RNA structure motifs that are conserved in mosquitoborneflaviviruses was demonstrated. In this regard, new models and patterns of 3’UTRconservation among all known flaviviruses were constructed. Employing host adaptationassays and deep sequencing analysis, different viral populations were characterized fromdistinct hosts. Interestingly, the sequence variations detected modified the secondarystructure of a single RNA structure. Mutational analysis and virus fitness measurements inmosquito cells and infected mosquitoes showed the requirement of RNA structure duplicationas a mechanism to maintain high viral fitness during host mosquito-human switch. Together,these results provide new knowledge about dengue virus biology useful for rationaldevelopment of antiviral strategies. Importantly, in these studies we present new mechanismsof virus-host adaptation that will help the understanding of epidemiological and evolutionaryaspects of viral pathogens transmitted by insects.
Citación:
---------- APA ----------
Villordo, Sergio Manuel. (2015). Estudios de estructuras de ARN que regulan la replicación del virus del dengue en humanos y mosquitos. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n6001_Villordo
---------- CHICAGO ----------
Villordo, Sergio Manuel. "Estudios de estructuras de ARN que regulan la replicación del virus del dengue en humanos y mosquitos". Tesis Doctoral, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 2015.https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n6001_Villordo
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