Registro:
| Documento: | Tesis Doctoral |
| Disciplina: | quimica |
| Título: | N- Homocisteinilación de proteínas plasmáticas involucradas en la red de fibrina |
| Autor: | Genoud, Valeria |
| Editor: | Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |
| Filiación: | Departamento de Química Biológica (DQB). Laboratorio de Hemostasia y Trombosis (LEA)
|
| Publicación en la Web: | 2018-12-15 |
| Fecha de defensa: | 2015-07-31 |
| Fecha en portada: | 2015 |
| Grado Obtenido: | Doctorado |
| Título Obtenido: | Doctor de la Universidad de Buenos Aires en el área de Química Biológica |
| Director: | Quintana, Irene L. |
| Consejero: | Nesse, Alcira |
| Jurado: | Fink, Nilda E.; Forastiero, Ricardo R.; Heller, Paula G. |
| Idioma: | Español |
| Formato: | PDF |
| Handle: |
http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n5789_Genoud |
| PDF: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/tesis/tesis_n5789_Genoud.pdf |
| Registro: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/tesis/document/tesis_n5789_Genoud |
| Ubicación: | Dep.QUI 005789 |
| Derechos de Acceso: | Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Genoud, Valeria. (2015). N- Homocisteinilación de proteínas plasmáticas involucradas en la red de fibrina. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n5789_Genoud |
Resumen:
La hiperhomocisteinemia, concentración elevada de homocisteína (Hcy) plasmática, constituye unfactor de riesgo independiente para la enfermedad vascular. En plasma la Hcy se encuentra unida aproteínas, formando dímeros, como Hcy reducida y como homocisteína-tiolactona (HTL). La reacciónentre los grupos ε-amino de los residuos lisina de las proteínas y el grupo carbonilo de la HTL se denomina N-homocisteinilación. Este proceso alteraría la estructura y función de compuestos biológicos. En la presente tesis, los estudios realizados con plasma humano demostraron que la HTL provocó unproceso de coagulación más lento que el control. Sin embargo, las redes de fibrina obtenidas resultaronmás densas, con fibras más cortas y ramificadas, mostrando mayor resistencia a la lisis. Estosresultados sugirieron que componentes del sistema hemostático podrían ser N-homocisteinilados. En particular, se estudió el efecto de la HTL sobre albúmina, fibrinógeno, factor XIII y fibronectina. Se detectaron importantes alteraciones estructurales y funcionales en los compuestos mencionadoscomo consecuencia de la exposición a soluciones de HTL, dependientes del tiempo de tratamiento yde la concentración del tioéster. Se evidenció la N-homocisteinilación de la albúmina por el aumentodel número de grupos sulfhidrilo libres, modificando la carga neta positiva de la proteína y consecuentemente,alterando los perfiles electroforéticos obtenidos por diversas técnicas. La N-homocisteinilación del fibrinógeno produjo cambios en los procesos de formación y lisis de lafibrina similares a los observados con plasma N-homocisteinilado. Además, se demostró que la matrizde fibrina N-homocisteinilada favoreció el proceso angiogénico. La HTL provocó un aumento de laactividad de transglutaminasa del factor XIII y también de la unión de la fibronectina a fibrina. Porotro lado, se evidenció un importante efecto reductor de la HTL sobre las moléculas de fibrinógeno yfibronectina. Por lo tanto, las alteraciones mediadas por HTL detectadas en las proteínas de los sistemaspuros analizados, serían responsables de los cambios observados en el proceso de coagulacióndel sistema plasmático. Los procesos de N-homocisteinilación in vitro descriptos en la presente tesis contribuyen al esclarecimientode uno de los posibles mecanismos involucrados en la consecuencias fisiopatológicas de lahiperhomocisteinemia.
Abstract:
Hyperhomocysteinemia, a condition characterized by high homocysteine plasma levels, is an independentrisk factor for vascular disease. Homocysteine circulates as different species, mostly proteinbound, as low-molecular-weight disulfides, as its reduced form and as the cyclic thioester homocysteine-thiolactone (HTL). N-homocysteinylation is the reaction between the carboxyl group of HTLand the epsilon-NH2 of lysine residues, with the irreversible formation of protein adducts. This reactioncould alter the structure and function of biological compounds. In the present thesis, global coagulation tests and fibrin formation assays in the presence of HTLindicated a slower coagulation process. However, HTL-associated fibrin architecture was compactand highly branched, and made up of thinner and shorter fibers than the control. These results suggestedthat hemostatic system proteins could be N-homocysteinylated. In particular, HTL effects onalbumin, fibrinogen, factor XIII and fibronectin were evaluated. Depending on HTL concentration andincubation time, the molecular structure and function of these proteins were significantly modified. Increased free thiol groups and a loss of net positive charge in N-homocysteinylated albumin weredetected, showing altered electrophoretic profiles. Fibrinogen in the presence of HTL showed impaired fibrinoformation and lysis as observed with thehomocysteinylated plasmatic system. Moreover, fibrin networks related to HTL favored the angiogenicprocess. Factor XIII transglutaminase activity and fibronectin-fibrin binding were increased by N-homocysteinylation reactions. On the other hand, an important reducing effect on fibrinogen andfibronectin molecules was observed. Therefore, the changes observed in the purified N-homocysteinylatedproteins would be responsible of the alterations detected in the plasma coagulation process. The in vitro findings of the present thesis contribute to postulate a possible mechanism involved inthe pathophysiologic consequences related to hyperhomocysteinemia.
Citación:
---------- APA ----------
Genoud, Valeria. (2015). N- Homocisteinilación de proteínas plasmáticas involucradas en la red de fibrina. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n5789_Genoud
---------- CHICAGO ----------
Genoud, Valeria. "N- Homocisteinilación de proteínas plasmáticas involucradas en la red de fibrina". Tesis Doctoral, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 2015.https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n5789_Genoud
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