Interacciones de los Arenavirus Tacaribe y Junín con sus células hospedadoras en las etapas tempranas de la infección

Suyay Roldán, Julieta

Registro:

Documento:	Tesis Doctoral
Disciplina:	quimica
Título:	Interacciones de los Arenavirus Tacaribe y Junín con sus células hospedadoras en las etapas tempranas de la infección
Título alternativo:	Interactions of Tacaribe and Junin arenavirus with their host cells during early stage of infection
Autor:	Suyay Roldán, Julieta
Editor:	Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Filiación:	Departamento de Química Biológica. Instituto de Química Bilológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales (IQUIBICEN)
Publicación en la Web:	2015-08-20
Fecha de defensa:	2015-05-26
Fecha en portada:	2015-03-26
Grado Obtenido:	Doctorado
Título Obtenido:	Doctor de la Universidad de Buenos Aires en el área de Química Biológica
Director:	Candurra, Nélida A.
Consejero:	Castilla, Viviana
Jurado:	Paz, Dante A.; Caballaro, Lucía V.; Videla, Cristina M.
Idioma:	Español
Palabras clave:	ARENAVIRUS; ENDOCITOSIS; RECEPTOR DE TRANFERRINA; AUTOFAGIA; ENTRADAARENAVIRUS; ENDOCYTOSIS; TRANSFERRINE RECEPTOR; AUTOPHAGY; ENTRY
Tema:	biología/virología
Formato:	PDF
Handle:	http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n5720_SuyayRoldan
PDF:	https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/tesis/tesis_n5720_SuyayRoldan.pdf
Registro:	https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/tesis/document/tesis_n5720_SuyayRoldan
Ubicación:	Dep.QUI 005720
Derechos de Acceso:	Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Suyay Roldán, Julieta. (2015). Interacciones de los Arenavirus Tacaribe y Junín con sus células hospedadoras en las etapas tempranas de la infección. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n5720_SuyayRoldan

Resumen:

Los arenavirus son virus envueltos con genoma ARN segmentado cuyo ciclode replicación tiene polaridad bisentido. La entrada a las células blanco se realiza víaendocitosis mediada por receptor y posterior fusión dependiente de pH. Una vezque la nucleocápside se encuentra en el citoplasma se expresan 5 proteínasestructurales. La proteína mayoritaria asociada a la nucleocápside se denomina NP. A partir de un único precursor glicoproteico (GPC), se obtienen dos glicoproteínasvirales denominadas GP1 y GP2 y el péptido señal (SP), los cuales conforman lasestructuras claviformes encontradas en la envoltura viral. En este trabajo se estudiaron aspectos de la interacción virus-célula huésped,caracterizando el rol de distintas proteínas celulares en los eventos tempranos delciclo de multiplicación de los arenavirus Tacaribe (TCRV) y Junín (JUNV). Debido aque TCRV no utiliza el receptor de transferrina humano (hTfR) para entrar en lascélulas, se utilizo un modelo de células que expresan diferencialmente el TfR y seanalizaron las vías de entrada utilizadas por el virus. Para ello, se utilizaroninhibidores farmacológicos de las diferentes vías endocíticas (dependiente declatrina, colesterol, dinamina, acidificación endosomal y macropinocitosis) y seconfirmaron los resultados obtenidos utilizando construcciones dominantesnegativas unidas a GFP de proteínas involucradas en cada una de ellas. Estosexperimentos permitieron caracterizar que en aquellas líneas que no expresan elhTfR, la vía endocítica principal de entrada es la dependiente de clatrina, dinamina yacidificación endosomal mientras que en las células que si expresan dicho receptor,la vía principal es la macropinocitosis. La endocitosis del virus mediada por la unión a un receptor celular puededesencadenar diferentes señales intracelulares para beneficiarse de procesoscelulares. En este trabajo estudiamos la participación de la autofagia durante lainfección con JUNV en un modelo de células humanas. Se analizó la distribución dela proteína LC3 sobreexpresada (marcador de la vía de la autofagia), se utilizaroninhibidores farmacológicos y células con el gen Atg 5 mutado (esencial para laactivación de la vía convencional de la autofagia). Los resultados obtenidospermitieron determinar que esta vía se activa desde el inicio de la infección ypermanece activa hasta 24 hs post-infección. Los hallazgos presentados en este trabajo no sólo aportan conocimientosbásicos sobre los pasos iniciales del ciclo de replicación de estos arenavirus, sino queademás permite desarrollar nuevos blancos antivirales contra JUNV.

Abstract:

Arenavirus are enveloped viruses with a segmented RNA genome whichreplication cycle has a bisense polarity. The entry into the target cell depends on areceptor mediated endocitosis and a subsequent fusion pH dependant. Once thenucleocapsid is in the cytoplasm, 5 structural proteins are expressed. The majoritynucleocapsid associated protein it is called NP. From one glycoprotein precursor (GPC), two glycoproteins are obtained called GP1 and GP2 and the signal peptide (SP) which they shape the claviforme structures found in the viral envelope. In this work, interactions virus-host cells were studied, characterizing the rollof different cellular proteins in the early stage of the Tacaribe (TCRV) and Junin (JUNV) Areniavirus multiplication cycle. Since TCRV does not use the humantransferrine receptor (hTfR) to enter the cells, a model with a differential expressionof the TfR was used and the pathways used by the virus were analyzed. In order todo that, pharmacological inhibitors of the different endocytic pathways (dependenton clathrin, cholesterol, dinamin, endosomal acidification and macropinocytosis)were used and the results obtained were confirmed using dominant negative tagged GFP constructions involved in each one of them. These experiments allowed us tocharacterize that in those cells that do not express the hTfR, the main endocyticpathway used by TCRV is the one dependent on clathrin, dinamin and endosomalacidification, while in those cells expressing this receptor, the main pathway is demacropinocytosis. Receptor mediated endocytosis used by the virus can unleash differentintracellular signals in order to exploit different cellular processes. In this work westudied the autophagy involvement during the infection in a human cell line model. The distribution of the protein LC3 overexpressed (an autophagic marker) wasanalyzed. Pharmacological inhibitors of this pathway and Atg 5 gen mutated cells (essential for the conventional autophagy activation) were also used. Resultsobtained allow us to determine that this pathway is activated from the early steps ofinfection and remains active up to 24 hs post-infection. The findings presented in this work not only provides basic knowledge aboutthe initial steps of these arenavirus replication cycles, but also allows to develop newantiviral targets against JUNV.

Citación:

---------- APA ----------

Suyay Roldán, Julieta. (2015). Interacciones de los Arenavirus Tacaribe y Junín con sus células hospedadoras en las etapas tempranas de la infección. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n5720_SuyayRoldan

---------- CHICAGO ----------

Suyay Roldán, Julieta. "Interacciones de los Arenavirus Tacaribe y Junín con sus células hospedadoras en las etapas tempranas de la infección". Tesis Doctoral, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 2015.https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n5720_SuyayRoldan

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