Cambios en el patrón de metilación del DNA en mieloma múltiple y gamopatía monoclonal del significado incierto

Stanganelli, Carmen Graciela

Registro:

Documento:	Tesis de Maestría
Disciplina:	biologia
Título:	Cambios en el patrón de metilación del DNA en mieloma múltiple y gamopatía monoclonal del significado incierto
Título alternativo:	Changes in methylation pattern in multiple myeloma and monoclonal gammopathy of undetermined significance
Autor:	Stanganelli, Carmen Graciela
Editor:	Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Filiación:	Academia Nacional de Medicina de Buenos Aires (ANM). Instituto de Investigaciones Hematológicas "Mariano R. Castex" (IIHEMA). Departamento de Genética
Publicación en la Web:	2023-05-09
Fecha de defensa:	2007
Fecha en portada:	2007
Grado Obtenido:	Maestría
Título Obtenido:	Magíster de la Universidad de Buenos Aires en el área de Biología Molecular Médica
Director:	Slavutsky, Irma R.
Idioma:	Español
Tema:	biología/biología molecular médica
Formato:	PDF
Handle:	http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n4533_Stanganelli
PDF:	https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/tesis/tesis_n4533_Stanganelli.pdf
Registro:	https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/tesis/document/tesis_n4533_Stanganelli
Ubicación:	Dep.BMM 004533
Derechos de Acceso:	Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Stanganelli, Carmen Graciela. (2007). Cambios en el patrón de metilación del DNA en mieloma múltiple y gamopatía monoclonal del significado incierto. (Tesis de Maestría. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n4533_Stanganelli

Resumen:

Las alteraciones epigenéticas cumplen un rol importante en la carcinogénesis, enparticular, las islas CpG de las regiones promotoras de genes supresores de tumor (GST)son consideradas un importante mecanismo epigenético de inactivación génica. Elmieloma múltiple (MM) está caracterizado por la proliferación neoplásica de célulasplasmáticas monoclonales. El curso natural de la enfermedad puede progresar de gamopatía monoclonal de significado incierto (MGUS) a MM. Durante este proceso, múltiples alteraciones genéticas se adquieren secuencialmente, y la metilación aberrante de promotores puede ser uno de los pasos involucrados en dicha progresión. En este estudio evaluamos el estado de metilación de los siguientes GST: p15INK4B, p16INK4A, p14ARF, SOCS-1, p27, RASSF1A y p73, con el fin de determinar si estaban involucrados en la evolución de MGUS a MM. Se estudiaron 44 pacientes con MM (21hombres; edad media 68 años; Estadío clinico Durie-Salmon I: 20%, II: 14% y III: 66%) y 21 pacientes con MGUS (6 hombres; edad media 68 años). Todos los pacientes dieron unconsentimiento informado y el estudio fue aprobado por el Comité de Etica de nuestra institución. Se utilizaron sangre periférica de 10 individuos normales y CpGenome Universal Methylated DNA (Intergen) como controles negativos y positivos, respectivamente. El ADN fue extraído de las células de médula ósea de los pacientes y de sangreperiférica de los controles con el método de fenol/cloroformo. El estado de metilaciónfue analizado usando la técnica de Methylation Specific PCR (MSP). Se utilizaron el test t de Student y el test Exacto de Fischer para el análisis estadístico. Lasobrevida (SV) medida desde el diagnóstico hasta el último seguimiento o la muerte,fue estimada por el método de Kaplan-Meier y comparada por el test de log-rank. Secalculó el índice de metilación (IM; relación entre el número de genes metilados y elnúmero de genes analizados). La metilación de SOCS1 fue significativamente más frecuente enpacientes con MM (52%) que con MGUS (14%) (p=0,006). Las frecuencias de metilaciónde p14ARF, p15INK4B y p16INK4A fueron comparables en ambas entidades; 29%, 32% y 7%,respectivamente para MM; y 29%, 29% y 5% respectivamente, para MGUS. El gen TP73 mostró tendencia a mayor metilación en MM (45%) que en MGUS (33%). Se observó ausencia de metilación de p27 en todos los casos. Mientras que el porcentajede MM con al menos un gen metilado (84%) no mostró diferencias con el de MGUS (66,7%), la media de IM de MGUS fue menor (0,16; rango: 0,1-0,43) que en MM (0,24; rango: 0,14-0,71) (p<0,05). Ninguno de los genes evaluados estaba metilado en los individuos normales. No se halló correlación con: edad, nivel de componente M, tipo de cadenas livianas,estadío clínico de la enfermedad, hemoglobina, albúmina sérica, calcio, B2 microglobulinay LDH. En MM la metilación aberrante de p15INK4B estuvo significativamente asociadacon sexo masculino (p=0,009) y con el isotipo IgG (p=0,038). En MGUS, la metilaciónde SOCS1 aumentó con la edad (p=0,001). Las frecuencias de metilación similares dep14ARF, p15INK4B y p16INK4A observadas en MM y MGUS sugerirían que estos genes no estarían involucrados en la progresión de MGUS. Sin embargo, la metilación de SOCS1 fue significativamente más frecuente en MMque en MGUS, sugiriendo que la metilación de este gen podría estar involucradaen al evolución clonal de MGUS a MM. SOCS1 es un regulador negativo de la señalde citoquinas, de importancia en el desarrollo y la diferenciación de linfocitos. Su silenciamiento podría resultar en una respuesta a citoquinas aumentada, que podría favorecer el desarrollo neoplásico. El presente trabajo constituye la primera evaluación del estado de metilación de GST en MM y MGUS realizada en Argentina.

Abstract:

There is increasing evidence that, in addition to genetic aberrations, epigeneticprocesses play a major role in carcinogenesis. Particularly, hypermethylation of CpGislands of the promoter regions of tumor suppressor genes (TSG) is now considered asan important epigenetic mechanism for gene inactivation. Multiple myeloma (MM) ischaracterized by neoplastic proliferation of monoclonal plasma cells. The naturalcourse of disease may progress through monoclonal gammopathy of undetermined significance (MGUS) to MM. During this process, multiple genetic alterations aresequentially acquired and aberrant promoter hypermethylation might be one of the steps involved in this progression. In this study, we have evaluated methylation status of the following TSG: p15INK4B, p16INK4A, p14ARF, SOCS-1, p27, RASSF1A and p73 genes, in order to determine if they were involved in the evolutionof MGUS to MM. Forty four MM (21 males; mean age 67.5 years; Durie-Salmon clinicalstages: I: 20%, II: 14% and III: 66%) and 21 MGUS patients (6 males; mean age 68 years)were studied. All patients gave informed consent and the study was approved bythe Ethics Committee of our Institution. Peripheral blood samples from 10 normalindividuals and CpGenome Universal Methylated DNA (intergen) were used as negativeand positive controls, respectively. DNA was extracted from bone marrow cells ofpatients and peripheral blood cells of controls using phenol/chloroform method. Methylation status was performed using Methylation Specific PCR (MSP) technique. For statical analysis, Student t and Fisher exact test were used. Overall survival (OS)measured from diagnosis to the last follow-up or death was estimated by the kaplan-Meiermethod and compared by the log-rank test. The methylation index (MI; ratio between the number of genes methylated and the number of genes analyzed) was also calculated. SOCS-1 gene methylation was significantly more frequent in MM (52%) than in MGUSpatients (14%) (p=0,006) Frequencies of methylation of p14ARF, p15INK4B and p16INK4Awere comparable in both entities: 29%, 32% and 7%, respectively, for MM; and 29%, 29% and 5%, respectively, for MGUS. TP73 gene showed a tendency of higher methylationin MM (45%) than in MGUS (33%). All patients lacked methylation at p27 gene. Whereas the percentage of MM with at least one gene methylated (84%) did notshowed differences to that of MGUS (66,7%), the mean MI of MGUS was lower (0,16;range: 0,14-0,43) than that of MM (0,24; range 0,14-0,71) (p<0,05). None of the target genes were methylated in normal samples. No statistical correlation with:gender, age, level of M-component, type of light chain, stage of the disease, haemoglobin, serum albumin level, calcium, B2 microglobulin and LDH, were observed. In MM, aberrant methylation of p15INK4B was significantly associated with male gender (p=0,009) and IgG isotype (p=0,038). In MGUS, SOCS1 methylation increased withage (p=0,001). No significant differences in the OS between MM patients with or without methylation were observed. The similar frequency of p14ARF, p15INK4B, p16INK4A and RASSF1A gene methylationobserved in MM and MGUS would suggest that they are probably not involved inthe progression of MGUS. However, SOCS1 gene methylation was significantly more frequent in MM than in MGUS suggesting that methylation of this gene mightbe involved in clonal evolution of MGUS to MM. SOCS1 is a negative regulator ofcytokine signaling, being important in normal lymphocyte development and differentiation. Silencing of SOCS1 may result in greater responsiveness tocytokines, which may favour the neoplastic development. To our knowledge, this isthe first report of methylation in MM and MGUS from Argentina.

Citación:

---------- APA ----------

Stanganelli, Carmen Graciela. (2007). Cambios en el patrón de metilación del DNA en mieloma múltiple y gamopatía monoclonal del significado incierto. (Tesis de Maestría. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n4533_Stanganelli

---------- CHICAGO ----------

Stanganelli, Carmen Graciela. "Cambios en el patrón de metilación del DNA en mieloma múltiple y gamopatía monoclonal del significado incierto". Tesis de Maestría, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 2007.https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n4533_Stanganelli

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