Caracterización funcional de la proteína epididimaria DE (CRISP-1) a través de modelos in vitro y generación de animales "knock out"

Da Ros, Vanina G.

Registro:

Documento:	Tesis Doctoral
Disciplina:	biologia
Título:	Caracterización funcional de la proteína epididimaria DE (CRISP-1) a través de modelos in vitro y generación de animales "knock out"
Título alternativo:	Functional characterization of epididymal protein DE (CRISP-1) through in vitro studies and generation of "knock out" animals
Autor:	Da Ros, Vanina G.
Editor:	Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Lugar de trabajo:	Fundación del Instituto de Biología y Medicina Experimental - CONICET. Instituto de Biología y Medicina Experimental (IBYME)
Publicación en la Web:	2023-05-09
Fecha de defensa:	2007
Fecha en portada:	2007
Grado Obtenido:	Doctorado
Título Obtenido:	Doctor de la Universidad de Buenos Aires en el área de Ciencias Biológicas
Departamento Docente:	Departamento de Biodiversidad y Biología Experimental
Director:	Cuasnicú, Patricia S.
Idioma:	Español
Palabras clave:	EPIDIDIMO; FAMILIA CRISP; FERTILIZACION; CAPACITACION; ESPERMATOZOIDE; FERTILIDADEPIDIDYMIS; CRISP FAMILY; FERTILIZATION; CAPACITATION; SPERM; FERTILITY
Formato:	PDF
Handle:	http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n4070_DaRos
PDF:	https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/tesis/tesis_n4070_DaRos.pdf
Registro:	https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/tesis/document/tesis_n4070_DaRos
Ubicación:	QUI 004070
Derechos de Acceso:	Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Da Ros, Vanina G.. (2007). Caracterización funcional de la proteína epididimaria DE (CRISP-1) a través de modelos in vitro y generación de animales "knock out". (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales). Recuperado de http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n4070_DaRos

Resumen:

La proteína epididimaria de rata DE es el primer miembro descripto de la familia de proteínas ricas en cisteínas (CRISP) y, por ende, también conocida como CRISP-1. DE se asocia a la región dorsal de la cabeza del espermatozoide durante la maduración epididimaria, migra al segmento ecuatorial bajo condiciones capacitantes, y participa en el proceso de fusión de gametas a través de sitios complementarios presentes en la superficie del ovocito. El primer objetivo de este trabajo fue estudiar la influencia del bicarbonato, ión indispensable para la capacitación, sobre la migración de la proteína DE. En paralelo, se evaluó el efecto sobre otros dos parámetros espermáticos asociados a la capacitación, tales como la fosforilación de proteínas en tirosina y la expresión de la capacidad fusogénica. Los resultados indicaron que si bien los tres parámetros evaluados fueron bicarbonatodependientes, la migración de DE al segmento ecuatorial ocurriría a través de vías alternativas a la clásica cAMP/PKA, involucrada en la fosforilación en tirosina y la capacidad fusogénica del espermatozoide. El segundo objetivo de este trabajo consistió en estudiar los mecanismos moleculares por los cuales DE interactúa con sus sitios en el ovocito. El empleo de fragmentos recombinantes y péptidos sintéticos indicó que el sitio activo de DE residiría en una región de sólo 12 aminoácidos altamente conservada en todos los miembros de la familia CRISP. Finalmente, la relevancia de DE/CRISP-1 para la fertilidad fue estudiada a través de la generación de ratones “knock out” para dicha proteína. El análisis del fenotipo de los mismos indicó que si bien la fertilidad de los animales no se vio afectada, los espermatozoides presentaban una capacidad fusogéncia significativamente disminuida, sugiriendo que otras proteínas con características y/o función similares estarían compensando el efecto observado. En conjunto, estos resultados proveen importante información sobre los mecanismos moleculares involucrados en la interacción de gametas y apoyan la existencia de mecanismos compensatorios con el fin de asegurar el éxito de la fertilización.

Abstract:

Rat epididymal protein DE is the first described member of the cysteine rich secretory protein family (CRISP) and, thus also known as CRISP-1. DE associates with the dorsal region of the sperm head during epididymal maturation, migrates to the equatorial segment under capacitanting conditions and participates in gamete fusion through complementary sites on the egg surface. The first aim of this work was to study the influence of bicarbonate, essential anion for sperm capacitation, on DE migration. In parallel, we investigated the influence of bicarbonate on two other sperm functional parameters associated with capacitation, such as tyrosine protein phosphorylation and expression of the fusogenic ability. Results indicated that although the three parameter were bicarbonate-dependent, DE migration would occur through a signaling pathway alternative to the classic cAMP/PKA involved in tyrosine phosphorylation and expression of the fusogenic ability. The second objective of the present work was to study the molecular mechanisms involved in the interaction between DE and its complementary sites on the egg surface. The use of recombinant and synthetic peptides indicated that the active site of DE resides in a region of only 12 aminoacids highly conserved among members of the CRISP family. Finally, the relevance of DE/CRISP-1 for animal fertility was evaluated through the generation of knock out animals for this protein. The analysis of the phenotype of these animals showed that, although their fertility was not affected, the sperm fusogenic ability was significantly reduced, suggesting that other proteins with similar characteristics and/or function, would be compensating the described effect. Altogether, these results provide important information on the molecular mechanisms involve in gamete interaction, and support the existence of compensatory mechanisms to ensure the success of fertilization.

Citación:

---------- APA ----------

Da Ros, Vanina G.. (2007). Caracterización funcional de la proteína epididimaria DE (CRISP-1) a través de modelos in vitro y generación de animales "knock out". (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n4070_DaRos

---------- CHICAGO ----------

Da Ros, Vanina G.. "Caracterización funcional de la proteína epididimaria DE (CRISP-1) a través de modelos in vitro y generación de animales "knock out"". Tesis Doctoral, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 2007.http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n4070_DaRos

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