Registro:
| Documento: | Tesis Doctoral |
| Disciplina: | biologia |
| Título: | Células natural killer de decidua humana e inmunotolerancia materno-fetal |
| Título alternativo: | Human decidual natural killer cells and fetal-maternal immune tolerance |
| Autor: | Kopcow, Hernán Diego |
| Editor: | Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |
| Filiación: | Harvard University. Department of Molecular and Cellular Biology (MCB)\n
|
| Publicación en la Web: | 2023-05-09 |
| Fecha de defensa: | 2006 |
| Fecha en portada: | 2006 |
| Grado Obtenido: | Doctorado |
| Título Obtenido: | Doctor de la Universidad de Buenos Aires en el área de Ciencias Biológicas |
| Director: | Strominger, Jack L. |
| Consejero: | Arzt, Eduardo |
| Idioma: | Español |
| Palabras clave: | EMBARAZO; RELACIONES MATERNO-FETALES; CELULAS NATURAL KILLER; PERFIL DE EXPRESION DE GENES; SUBTIPOS DE LINFOCITOS; CENTRO ORGANIZADOR DE MICROTUBULOS; PERFORINA; GALECTINA 1; APOPTOSIS; INMUNOTOLERANCIA; UTERO; DECIDUAPREGNANCY; FETAL-MATERNAL RELATIONS; NATURAL KILLER CELLS; GENE EXPRESSION PROFILING; LYMPHOCYTE SUBSETS; MICROTUBULE ORGANIZING CENTER; PERFORIN; GALECTIN-1; APOPTOSIS; IMMUNOTOLERANCE; UTERUS; DECIDUA |
| Formato: | PDF |
| Handle: |
http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3956_Kopcow |
| PDF: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/tesis/tesis_n3956_Kopcow.pdf |
| Registro: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/tesis/document/tesis_n3956_Kopcow |
| Ubicación: | Dep.BIO 003956 |
| Derechos de Acceso: | Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Kopcow, Hernán Diego. (2006). Células natural killer de decidua humana e inmunotolerancia materno-fetal. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3956_Kopcow |
Resumen:
Durante el embarazo humano el feto constituye un implante hemialogeneico en el útero materno. Trofoblastos fetales invaden la decidua materna y como células extrañas deberían ser rechazadas. A pesar de encontrar abundantes células Natural Killer en la decidua (dNK) se mantienen a salvo de ataques por parte del sistema inmune materno. Las células dNK constituyen 50 a 90 % de los linfocitos presentes en la decidua humana durante el embarazo temprano, sin embargo es poco lo que se conoce respecto a su función. Se compararon los perfiles de expresión de las células dNK, caracterizadas por ser CD56brillante, con los perfiles de expresión de células Natural Killer periféricas de sangre (pNK) CD56brillante y CD56tenue por análisis con micorarrays y verificación de los datos por citometría de flujo y RT-PCR. Los resultados indican que las células dNK constituyen un subgrupo distinto a los dos subtipos de células pNK. Entre los ~10,000 genes estudiados, 278 genes mostraron un cambio de al menos tres veces en el nivel de expresión con un valor p<0.001 al comparar las células dNK con ambos subtipos de células pNK. En su mayoría (197 genes) el nivel de expresión se vio incrementado en las células dNK. La mayor parte de estos genes codifican proteínas de superficie, incluyendo los inusuales receptores NKG2E y Ly-49L, varios receptores de células killer de tipo inmunoglobulina (KIRs) , las subunidades de integrinas αD, αX, β y β5, y múltiples tetraspaninas (CD9,CD151, CD53, CD63, y TSPAN-5). Perforina y las granzimas A y B, moléculas efectoras de la actividad citotóxica de las células NK, también son sobre-expresadas por las células dNK. Las células dNK expresan los receptores activadores NKp30, NKp44, NKp46, NKG2D, y 2B4 como también LFA-1. A pesar de ser granulares y expresar las moléculas esenciales para poseer actividad lítica, las células dNK frescas mostraron tener una muy reducida actividad citotóxica sobre las células blanco MHC I negativas K562 y 721.221, aproximadamente 15% de la actividad citotóxica de las células pNK. Las células dNK formaron conjugados y sinapsis inmunológicas activadoras con células 721.221 y K562 en las que CD2, LFA-1 y actina fueron polarizadas al sitio de contacto con la célula blanco. Sin embargo, contrastando con las células pNK , fallaron en la polarización del centro organizador de microtúbulos y de gránulos conteniendo perforina hacia la sinapsis inmunológica formada, explicando la falta de citotoxicidad. Adicionalmente, entre los genes sobre-expresados por células dNK se encuentran Galectina 1 , PSG11 y PP14 , tres proteínas secretadas con funciones inmunosupresoras . Galectina 1 es una lectina con afinidad por residuos de poli-N-acetilactosaminas. Posee la capacidad de inducir apoptosis de linfocitos T CD8 activados y, como aquí se muestra, de células NK. Western blots y ensayos de ELISA muestran que galectina 1 es expresada y secretada por células dNK pero no por células pNK . La tinción con Anexina V y ensayos de TUNEL ( Terminal deoxynucleotidyl transferase biotin-dUTP Nick End Labeling ) de linfocitos de decidua frescos revelan la presencia de una población de células T apoptótica. Medios condicionados por células dNK pueden inducir apoptosis de células T periféricas activadas con PHA y de células MOLT4, una línea de células T. La capacidad apoptótica de los medios condicionados es bloqueada por lactosa , un disacárido que compite la unión de galectina 1 a sus ligandos y bloquea su capacidad apoptótica, sugiriendo que las células dNK pueden contribuir a la tolerancia materno-fetal a través de la secreción de galectina 1 entre otros mecanismos.
Abstract:
During human pregnancy the fetus constitutes an hemiallogeneic implant into the maternal uterus. Fetal trophoblasts invade the maternal decidua and as foreign cells they should be rejected. Desite encountering abundant NK cells in the decidua (dNK), they remain spared from attack by the maternal immune sytem. Natural killer cells constitute 50–90% of lymphocytes in human uterine decidua in early pregnancy. Gene expression profiles of CD56bright uterine dNK cells were compared with that of CD56bright and CD56dim peripheral NK cell subsets by microarray analysis, with verification of results by flow cytometry and RT-PCR. Results indicate that dNK cells constitute a distinct subgroup from both pNK subsets. Among the ~10,000 genes studied, 278 genes showed at least a threefold change with p value < 0.001 when comparing the dNK and peripheral NK cell subsets, most displaying increased expression in dNK cells. The largest number of these encoded surface proteins, including the unusual lectinlike receptors NKG2E and Ly-49L, several killer cell Ig like receptors (KIRs), the integrin subunits αD, αX, β1, and β5, and multiple tetraspanins (CD9,CD151, CD53, CD63, and TSPAN-5). Perforin and granzymes A and B, effector molecules of NK cell cytotoxicity, are also overexpressed by dNK cells. dNK express perforin, granzymes A and B and the activating receptors NKp30,NKp44, NKp46, NKG2D, and 2B4 as well as LFA-1. Even though they are granular and express the essential molecules required for lysis, fresh dNK cells displayed very reduced lytic activity on classical MHC I negative targets K562 and 721.221, ~15% of that of peripheral NK cells. dNK cells formed conjugates and activating immune synapses with 721.221 and K562 cells in which CD2, LFA-1 and actin were polarized toward the contact site. However, in contrast to peripheral NK cells, they failed to polarize their microtubule organizing centers and perforin-containing granules to the synapse, accounting for their lack of cytotoxicity. Additionally, Galectin-1 , PSG11 and PP14, three secreted proteins with immunomodulatory function, were among the genes over-expressed by dNK cells . Galectin-1 is a lectin with high affinity for poly-N-acetylactosamine moieties. It has the capacity to induce apoptosis of activated CD8 T cells and, as described here, of NK cells. Western blot and ELISA assays show that galectin-1 is expressed and secreted by dNK but not by pNK cells. Annexin V staining and TUNEL (Terminal deoxynucleotidyl transferase biotin-dUTP Nick End Labeling) of freshly isolated decidual lymphocytes reveal a population of apoptotic CD3+ T cells. Conditioned media from dNK cells induced apoptosis of PHA activated peripheral T cells and a T cell line (MOLT4). The pro-apoptotic activity of dNK cells condined media is blocked with lactose, a disaccharide that competes the binding of galectin-1 to its polylactosamine ligands and blocks galectin-1 apoptotic activity, suggesting that dNK cells can contribute to fetal-maternal tolerance by galectin-1 secretion among other mechanisms.
Citación:
---------- APA ----------
Kopcow, Hernán Diego. (2006). Células natural killer de decidua humana e inmunotolerancia materno-fetal. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3956_Kopcow
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Kopcow, Hernán Diego. "Células natural killer de decidua humana e inmunotolerancia materno-fetal". Tesis Doctoral, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 2006.https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3956_Kopcow
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