Registro:
| Documento: | Tesis Doctoral |
| Disciplina: | biologia |
| Título: | Caracterización de antígenos recombinantes de la glicoproteína E2 del virus de la diarrea viral bovina y su utilización como vacunas y reactivos de diagnóstico |
| Autor: | Marzocca, Marina Patricia |
| Editor: | Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |
| Filiación: | Centro de Virología Animal (CEVAN)
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| Publicación en la Web: | 2017-03-01 |
| Fecha de defensa: | 2003 |
| Fecha en portada: | 2003 |
| Grado Obtenido: | Doctorado |
| Título Obtenido: | Doctor en Ciencias Biológicas |
| Director: | La Torre, José Leonardo |
| Director Asistente: | Grigera, Pablo Rafael |
| Idioma: | Español |
| Tema: | biología/virología
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| Formato: | PDF |
| Handle: |
http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3615_Marzocca |
| PDF: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/tesis/tesis_n3615_Marzocca.pdf |
| Registro: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/tesis/document/tesis_n3615_Marzocca |
| Ubicación: | Dep.BIO 003615 |
| Derechos de Acceso: | Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Marzocca, Marina Patricia. (2003). Caracterización de antígenos recombinantes de la glicoproteína E2 del virus de la diarrea viral bovina y su utilización como vacunas y reactivos de diagnóstico. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3615_Marzocca |
Resumen:
El Virus de la Diarrea Viral Bovina (BVDV) pertenece al género Pestivirus de lafamilia Flaviviridae y es causante de importantes pérdidas económicas en la industriaganadera regional y mundial. Las manifestaciones clinicas de la infección son variadasy las pérdidas en la producción ganadera se deben principalmente a la disminución enla producción de leche, retraso en el crecimiento, aumento de infecciones secundariasy aumento de la mortalidad en animales jóvenes. El control epidemiológico de BVDV se realiza a través de programas devacunación masiva y eliminación de animales persistentemente infectados, principalesdiseminadores del virus en los rebaños. Los bajos títulos virales obtenidos en cultivo de tejidos constituyen unadificultad importante en la elaboración industrial de vacunas inactivadas. La utilizaciónde cepas atenuadas como vacunas anti BVDV es, por otra parte, un riesgo mayor yaque la aparición de revertantes en un animal pre-infectado con BVDV podríadesencadenar la “enfermedad de las mucosas”, que es fatal y en vacas preñadaspodría dar origen a una camada de terneros persistentemente infectados. Eldiagnóstico de las infecciones con BVDV, realizada a través de la detección deanticuerpos en suero bovino por seroneutralización y/o inmunoensayo enzimática (ELISA) también presenta dificultades debidas, entre otras, a la necesidad de contarcon infraestructuras adecuadas para el cultivo de células y a los desafios técnicos quepresenta la obtención de antígeno purificado. En este trabajo se expresó en sistemas recombinantes y se caracterizóbioquímica e inmunológicamente al principal inmunógeno de BVDV, la glicoproteína E2. La proteína fue expresada en células de mamífero y de insecto, en su formaentera (rE2) y delecionada en su extremo carboxilo terminal de anclaje a membrana (ΔrE2) y se ensayó su desempeño como vacuna y como antígeno para diagnóstico. Laproteína recombinante E2 (rE2) presento características electroforéticas einmunoquímicas idénticas a la E2 viral y resultó ser un potente inmunógeno enbovinos. La incorporación del gen de rE2 en el genoma de un Virus de la estomatitisvesicular (VSV) recombinante permitió, también , la creación de un virus atenuado de VSV (VSV-E2) capaz de inducir una excelente respuesta humoral anti BVDV enratones y óptima producción de E2 recombinante en células de BHK en cultivo. En este trabajo también se demostró que la proteína ΔrE2 es expresada yliberada al sobrenadante del cultivo de células de Drosophila melanogaster lo quepermitió contar con una preparación rápida y relativamente pura de antígeno. Este fueutilizado en un test de ELISA de captura (a través de un anticuerpo monoclonal antirE2, también desarrollado en el curso de este trabajo de Tesis) que presenta altasensibilidad y especificidad para la detección de anticuerpos anti BVDV en suerosbovinos.
Abstract:
The Bovine Viral Diarrhea Virus (BVDV) belongs to the genus Pestivirus of thefamily Flaviviridae and is responsible for important economic losses in the cattleindustry throughout the world. The clinical manifestations of the infection are variedand the looses in the cattle production are mainly due to the decreased production ofmilk, delay in the growth, increase of secondary infections and increase of the mortallyin young animals. Control of BVDV is carried through programs of massive vaccination andelimination of persistently-infected animals that are the main source of contagiousvirus in the field. Deficient virus production in cell culture constitutes an important difficulty in theindustrial elaboration of inactivated vaccines. The use of attenuated viruses as BVDVimmunogens on the other hand, is risky since revertants could produce mucosaldisease in preinfected animals. This is eventually fatal and, in the case of pregnantcows, could give origin to persistently infected calves. The diagnosis of BVDV infections is accomplish by detection of specificantibodies in bovine serum in seroneutralization and/or enzyme linked immuno (ELISA) assays. These techniques also present difficulties related, for instance, to thenecessity of having appropiate infrastructures for cell culture and obtaining purifiedantigen in workable amounts, as well. In this work the main immunogenic protein of BVDV, the glycoprotein E2, wasexpressed in different recombinant systems and characterized, subsequently , biochemically and immunologically. The protein was expressed in mammalian and ininsect cells either as a whole protein (rE2) or as a deleted form lacking its carboxiterminal membrane anchor (ΔrE2) and its potential as immunogen and as a diagnosticantigen was explored. The recombinant protein E2 (rE2) showed electrophoretic andimmunochemical characteristics identical to those of its viral counterpart and alsoinduced a potent anti BVDV serum response in bovines when administerd in an oilemulsion. Incorporation of the rE2 gene in a recombinant Vesicular stomatitis virus (VSV)genome allowed us, in addition, to generate an attenuated virus of VSV (VSV-E2)able to induce an excellent humoral anti-BVDV response in mice and to producerecombinant E2 in infected BHK cell cultures. The protein ΔrE2 is expressed and released to the extracellular medium oftransformed Drosophila melanogaster cells expressing the recombinant protein, inwhat turned to be a quick and simple way to get relatively pure and soluble antigen. This allowed the design of an ELISA test using soluble rE2 as antigen and a specificanti E2 capture MAb (developed during this Thesis work using rE2 expressed bybaculovirus) that presents high sensibility and specificity for the detection of anti BVDVantibodies in bovine sera.
Citación:
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Marzocca, Marina Patricia. (2003). Caracterización de antígenos recombinantes de la glicoproteína E2 del virus de la diarrea viral bovina y su utilización como vacunas y reactivos de diagnóstico. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3615_Marzocca
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Marzocca, Marina Patricia. "Caracterización de antígenos recombinantes de la glicoproteína E2 del virus de la diarrea viral bovina y su utilización como vacunas y reactivos de diagnóstico". Tesis Doctoral, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 2003.https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3615_Marzocca
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