Registro:
| Documento: | Tesis Doctoral |
| Disciplina: | biologia |
| Título: | Efecto del óxido nítrico sobre la fisiología de la adenohipófisis de la rata |
| Autor: | Velardez, Miguel Omar |
| Editor: | Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |
| Filiación: | Departamento de Ciencias Biológicas (DB)
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| Publicación en la Web: | 2017-03-01 |
| Fecha de defensa: | 2002 |
| Fecha en portada: | 2002-08 |
| Grado Obtenido: | Doctorado |
| Título Obtenido: | Doctor en Ciencias Biológicas |
| Director: | Duvilanski, Beatriz Haydée |
| Idioma: | Español |
| Tema: | biología/endocrinología
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| Formato: | PDF |
| Handle: |
http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3471_Velardez |
| PDF: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/tesis/tesis_n3471_Velardez.pdf |
| Registro: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/tesis/document/tesis_n3471_Velardez |
| Ubicación: | Dep.BIO 003471 |
| Derechos de Acceso: | Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Velardez, Miguel Omar. (2002). Efecto del óxido nítrico sobre la fisiología de la adenohipófisis de la rata. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3471_Velardez |
Resumen:
Antecedentes La regulación de los distintos procesos fisiológicos de la adenohipófisis, tales comodesarrollo, diferenciación, secreción hormonal y muerte celular, implica la acción de unavariedad de factores provenientes tanto de tejidos periféricos como del sistema nerviosocentral o de la propias células adenohipofisarias. El óxido nítrico (NO) puede regular lasecreción de hormonas hipofisarias. Previamente demostramos que el NO inhibe lasecreción basal de prolactina afectando diferentes mecanismos intracelulares. Sinembargo la acción del NO sobre las vías de segundos mensajeros de origen lipídiconecesita ser estudiada. Por otro lado, existen diversos estados fisiológicos como laterminación de la lactancia o patofisiológicos como los procesos inflamatorios quepueden inducir muerte celular en la adenohipófisis. A pesar de que la muerte celularparece ser un evento frecuente en la adenohipófisis, son pocos los estudios realizadoshasta el momento sobre posibles factores intrahipofisarios inductores de apoptosis. Objetivos Evaluar la acción del NO sobre el metabolismo de mensaieros intracelulares de origenlipídico que afectan la secreción de prolactina adenohipofisaria. Investigar el efecto del NO sobre la viabilidad celular adenohipofisaria. Métodos Se investigó el efecto del NO sobre la actividad de las lipooxigenasas (LOX) y de lasciclooxigenasas (COX) y su relación con la secreción de prolactina mediante la utilizaciónde dadores de NO y sustratos e inhibidores de las NO sintasas (NOS) en adenohipófisisenteras. Se determinó la producción de metabolitos del ócido araquidónico (AA) por latécnica de radioconversión usando como precursor AA radioactivo. También se estudió el efecto del NO sobre el metabolismo de fosfoinosítidos en célulasadenohipofisarias de rata y su relación con la secreción de prolactina. Se utilizarondadores de NO e inhibidores de las NOS en cultivos primarios de adenohipófisispremarcados con inositol radioactivo como precursor de los distintos inositoles fosfato (IPs). Se cuantificó la producción de IPs por cromatografía de intercambio iónico. En ambos casos se estudiaron los posibles mecanismos por los cuales el NO afectó lasíntesis de dichos segundos mensajeros. Para estudiar la acción del NO sobre la viabilidad celular adenohipofisaria, se examinó laactividad celular (ensayo de MTT)y la morfología nuclear de las células adenohipofisariasen cultivo, utilizando DETA/NO como un dador de acción prolongada. Se estudiarondiferentes mecanismos por los cuales el NO podría afectar la viabilidad celular (capacidad nitrosilante, acción de los peroxinitritos, activación de las caspasas). Ademós,mediante técnicas inmunocitoquímicas, se determinaron los tipos celulares afectados porel NO. En todos los casos se cuantificó la liberación de prolactina por radioinmunoensayo. Resultados El NO inhibió la actividad de la LOX produciendo una disminución de la síntesis de 5-HETEy estimuló la actividad de la COX aumentando la síntesis de prostaglandinas ytromboxanos. Dado que el 5-HETE esta involucrado en la estimulación de la secreciónbasal de prolactina, y que ésta es la única hormona adenohipofisaria con una liberaciónbasal espontánea, es probable que la disminución de la actividad de la LOX inducida porel NO esté mediando en parte el efecto inhibitorio tónico del NO sobre la liberaciónbasal de prolactina. El NO inhibió la síntesis de IPs estimulada por Angll o TRH, sin afectar su síntesis basal. La inhibición de la actividad de la PLC por NO involucraría un mecanismo independientede la vía guanilil ciclasa soluble / cGMP / PKG. El NO no tendría una acción directasobre la PLC, sino que estaría modificando algún factor de la vía de transducción deseñales localizado entre el receptor de membrana y la proteína G. Con respecto al efecto del NO sobre la viabilidad celular, demostramos que el NOproduce muerte celular con características propias de un proceso apoptótico. En esteproceso participarían la caspasa-3 y la caspasa-9 pero no estarían involucradosmecanismos de nitrosilación o la acción de peroxinitritos. Asimismo, la acciónproapoptótica del NO parece afectar preferencialemente a los lactotropos. Conclusión El NO al afectar dos procesos fisiológicos fundamentales de la adenohipófisis como sonla secreción hormonal y la muerte celular, puede ser considerado como un factor clavedentro los reguladores de la fisiología de la adenohipófisis.
Abstract:
Background The regulation of the physiological processes in anterior pituitary, such as development,differentiation, hormone secretion and cell death, involves a variety of factors coming fromperipheral tissues, central nervous system and the pituitary itself. Nitric oxide (NO) is ableto regulate anterior pituitary hormone release. Previously, we demonstrated that NOinhibits basal prolactin release by affecting several intracellular pathways. However, NOaction on lipidic second messengers in anterior pituitary needs further investigation. Onthe other hand, there are some physiological -such as termination of lactation-, orpathophysiological states -such as inflammation-, which can induce cell death in theanterior pituitary gland. In spite of the fact that cell death is a frequent event in the anteriorpituitary gland, there is little evidence about possible apoptosis inducing factorssynthesized by anterior pituitary cells. Objectives To evaluate NO action on lipidic intracellular messengers that affect prolactin secretion. To investigate the effect of NO on anterior pituitary cell viability. Methods NO action on lipooxygenase (LOX)and cyclooxygenase (COX) activities and their relationwith prolactin release were investigated by using NO donors and NOS substrate andinhibitors in whole anterior pituitaries. Production of arachidonic acid (AA) metabolites wascarried out by a radioconversion technique, using radiolabeled AA as a precursor. Also the effect of NO on phosphoinositides metabolism in rat anterior pituitary cells wasstudied. We used NO donors and NOS substrate and inhibitors in primary cultures ofanterior pituitary cells prelabeled with radioactive inositol as a precursor of inositolphosphates (IPs).Production of IPs was quantified by ionic exchange chromatography. In all cases we studied the mechanisms of action by which NO affected the synthesis ofthose second messengers. In order to study NO action on anterior pituitary cell viability, we investigated the changesin cellular activity (MTT assay) and nuclear morphology in primary cultures of anteriorpituitary cells by using DETA/NO as a long term NO releaser. We studied differentmechanisms by which NO could affect cell viability (nytrosylating activity, peroxynitriteaction, caspases activation). Besides, we determined the cell types affected by NO byimmunocytochemistry. In all cases prolactin release was quantified by radioimmunoassay. Results NO inhibited LOX activity producing a decrease in 5-HETE synthesis, and stimulated COXactivity producing an increase of prostaglandins and thromboxanes. Since 5-HETE isinvolved in the stimulation of basal prolactin release and taking into account that prolactinis the only anterior pituitary hormone with an spontaneously high basal release, it ispossible that the decrease in LOX activity induced by NO is mediating, at least in part, thetonic inhibitory effect of NO on prolactin release. NO inhibited Angll- or TRH-stimulated IPs synthesis, without affecting basal synthesis. Theinhibition of PLC activity may involve a soluble guanylyl cyclase/cGMP/PKG-independentmechanism. NO seems not to act on PLC, but it could be modifying some factor localizedbetween membrane receptor and G protein. Concerning NO effect on cell viability, we demonstrated that NO produces cell death withcharacteristics of apoptosis. In this effect, caspase-3 and caspase-9 but not nytrosylationevents or peroxynitrites may be participating. Likewise, lactotrophs seem to bepreferentially affected by the proapoptotic action of NO. Conclusion NO affected two relevant physiological processes in the anterior pituitary gland, hormonalsecretion and cell death. Therefore, it could be considered as a key regulatory factor of thephysiology of the rat anterior pituitary gland.
Citación:
---------- APA ----------
Velardez, Miguel Omar. (2002). Efecto del óxido nítrico sobre la fisiología de la adenohipófisis de la rata. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3471_Velardez
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Velardez, Miguel Omar. "Efecto del óxido nítrico sobre la fisiología de la adenohipófisis de la rata". Tesis Doctoral, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 2002.https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3471_Velardez
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