Registro:
| Documento: | Tesis Doctoral |
| Disciplina: | biologia |
| Título: | Relación estructura-función de la proteína epididimaria de rata "DE", y su potencial uso para el desarrollo de un método de regulación de la fertilidad |
| Título alternativo: | Structure-function relationship of rat epididymial protein DE and its potential use for the development of an immunological method of fertility regulation |
| Autor: | Ellerman, Diego A. |
| Editor: | Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |
| Filiación: | Instituto de Biología y Medicina Experimental (IByME)
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| Publicación en la Web: | 2017-03-01 |
| Fecha de defensa: | 2001 |
| Fecha en portada: | 2001 |
| Grado Obtenido: | Doctorado |
| Título Obtenido: | Doctor en Ciencias Biológicas |
| Director: | Cuasnicú, Patricia S. |
| Idioma: | Español |
| Palabras clave: | REPRODUCCION; FERTILIZACION; ESPERMATOZOIDE; OVOCITO; FUSION DE MEMBRANAS; FERTILIDAD; ANTICONCEPCION; ANTICUERPOS ANTI-ESPERMATOZOIDEREPRODUCTION; FERTILIZATION; SPERM; OOCYTE; MEMBRANE FUSION; CONTRACEPTION; ANTI-SPERM ANTIBODES |
| Tema: | biología/biología molecular y celular
biología/inmunología
biología/reproducción
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| Formato: | PDF |
| Handle: |
http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3358_Ellerman |
| PDF: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/tesis/tesis_n3358_Ellerman.pdf |
| Registro: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/tesis/document/tesis_n3358_Ellerman |
| Ubicación: | Dep.BIO 003358 |
| Derechos de Acceso: | Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Ellerman, Diego A.. (2001). Relación estructura-función de la proteína epididimaria de rata "DE", y su potencial uso para el desarrollo de un método de regulación de la fertilidad. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3358_Ellerman |
Resumen:
La glicoproteína epididimaria de rata "DE" se asocia al espermatozoide durantela maduración, y participa en el proceso de fusión de gametas a través desitios complementarios presentes en la superficie del ovocito. Con el fin decomprender los mecanismos involucrados en la participación de DE en dichoproceso, se estudió la importancia de la estructura de DE para la actividad dela proteína. El clonado del ADNc de DE permitió obtener la secuencia de los 227 aminoácidos (aa) de la proteína. El análisis de dicha secuencia indicó que DE pertenece a la familia CRISP (cystein rich secretory proteins), y lapresencia de 16 cisteínas en la molécula. El ADNc fue utilizado luego paraexpresar la proteína recombinante en bacterias (recDE). El estudio de recDE yde la proteína nativa deglicosilada, indicó que la actividad biológica residiría enla porción peptídica de la molécula. Por otro lado, el análisis del estado deoxidación de las cisteínas indicó que la mayoría de ellas formaría puentesdisulfuro, y que la ruptura de los mismos afectaría la actividad de la proteína. La expresión de distintos fragmentos recombinantes de DE y su empleo enensayos biológicos, reveló que la actividad de la proteína residiria en la regióncomprendida entre los aa 62-158. Resultados previos de nuestro laboratorio indican que la inmunización de ratascon proteína DE produce una respuesta inmune y una inhibición significativade la fertilidad. El presente trabajo indica que los mecanismos responsables dedicha inhibición involucrarían la entrada de anticuerpos anti-DE al tractoreproductivo, su interacción con los espermatozoides, y la disminución de lacapacidad fertilizante de los mismos, abriendo la posibilidad del potencial usode DE para el desarrollo de un método inmunológico de regulación de lafertilidad. Dado que para ello es necesario poder disponer del antígeno engrandes cantidades, la proteína recombinante fue utilizada en ensayos deinmunización, que indicaron que recDE, al igual que la proteína nativa, escapaz de producir una respuesta inmune y una reducción de la fertilidad. Conel fin de investigar la posible aplicación de este método inmunológico en elhombre, la capacidad inmunogénica de la proteína humana homóloga a DE,proteína ARP, fue estudiada en un modelo de primates no humanos,observándose la inducción de una elevada respuesta inmune en los animalesinmunizados. En conjunto, los resultados obtenidos en este trabajo contribuyen alesclarecimiento de los mecanismos involucrados en la participación de DE enel proceso de fusión de gametas, y apoyan el potencial uso de esta proteína ysus homólogos para el desarrollo de un método inmunológicode regulación dela fertilidad tanto en animales como en el hombre.
Abstract:
Rat epididymal glycoprotein “DE” associates with sperm during maturation andparticipates in gamete fusion through complementary sites localized on the eggsurface. To get a better understanding of the molecular mechanisms underlyingthe participation of DE in this process, the relevance of protein DE structure forits biological activity was studied. Cloning of DE cDNA allowed obtaining thesequence of the 227 aminoacids (aa) of the protein. The analysis of thesequence, indicated that DE belongs to the CRISP (cystein rich secretoryproteins) family, and the presence of 16 cysteines in the molecule. DE cDNAwas then used for the bacterial expression of the recombinant protein (recDE). The study of recDE as well as of the deglycosilated native DE (nDE) indicatedthat the activity of the protein resides on the peptidic portion of the molecule. The evaluation of the oxidative state of cysteines indicated that most of themwould be involved in disulfide bridges, and that the rupture of these bridgeswould affect the protein activity. The expression of different recombinantfragments of DE, and their use in biological assays indicated that the biologicalactivity of DE would be located within the region encompassed by aa 62-158. Previous results from our laboratory indicate that immunization of rats withprotein DE induces an immune response and a significant inhibition of fertility. The present study indicated that the mechanisms responsible for this inhibitionwould involve the entry of antibodies into the reproductive tract, theirassociation to sperm, and the reduction of sperm fertilizing ability. Theseresults suggested the potential use of DE for developing and immunologicalmethod of fertility regulation. Since an important requirement for this purpose,is the possibility of obtaining the antigen in large quantities, recombinant DEwas used in immunization studies, which revealed that, like native DE, recDE isable to produce an immune response as well as an inhibition of fertility. In orderto explore the potential application of this immunological approach to humans,the immunogenic ability of the human protein homologue of DE, protein ARP,was evaluated in a non human primate model. The induction of a high immuneresponse was observed in all the immunized animals. Together, the results obtained in this work contribute to a better understandingof the molecular mechanisms underlying the participation of DE in sperm-eggfusion, and support the potential use of DE for the development of animmunological method of both animal and human fertility regulation.
Citación:
---------- APA ----------
Ellerman, Diego A.. (2001). Relación estructura-función de la proteína epididimaria de rata "DE", y su potencial uso para el desarrollo de un método de regulación de la fertilidad. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3358_Ellerman
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Ellerman, Diego A.. "Relación estructura-función de la proteína epididimaria de rata "DE", y su potencial uso para el desarrollo de un método de regulación de la fertilidad". Tesis Doctoral, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 2001.https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3358_Ellerman
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