Expresión de antígenos derivados del virus de la fiebre aftosa en diferentes sistemas eucarióticos

Taboga, Oscar Alberto

Registro:

Documento:	Tesis Doctoral
Título:	Expresión de antígenos derivados del virus de la fiebre aftosa en diferentes sistemas eucarióticos
Título alternativo:	Expression of antígens derived from foot-and-mouth disease virus 1n different eukariotic systems
Autor:	Taboga, Oscar Alberto
Editor:	Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Lugar de trabajo:	Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA) Castelar. Instituto de Investigaciones en Ciencias Veterinarias (CICV). Instituto de Biotecnología
Publicación en la Web:	2017-03-01
Fecha de defensa:	2000
Fecha en portada:	2000
Grado Obtenido:	Doctorado
Título Obtenido:	Doctor en Ciencias Biológicas
Departamento Docente:	Departamento de Biología
Director:	Palma, Eduardo Lucio
Idioma:	Español
Palabras clave:	FIEBRE AFTOSA; VACUNAS RECOMBINANTES; SISTEMAS DE EXPRESION EUCARIOTICOSFOOT-AND-MOUTH DISEASE; RECOMBINANT VACCINES; EUKARYOTIC EXPRESSION SYSTEMS
Formato:	PDF
Handle:	https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3255_Taboga
PDF:	https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/tesis/tesis_n3255_Taboga.pdf
Registro:	https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/tesis/document/tesis_n3255_Taboga
Ubicación:	BIO 003255
Derechos de Acceso:	Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Taboga, Oscar Alberto. (2000). Expresión de antígenos derivados del virus de la fiebre aftosa en diferentes sistemas eucarióticos. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3255_Taboga

Resumen:

La fiebre aftosa es una enfermedad de gran importancia económica que afectaprincipalmente al ganado bovino. Esta enfermedad está causada por unpicornavirus, el virus de la fiebre aftosa (VFA). El control de la enfermedad se llevaa cabo mediante eliminación de los animales infectados y vacunación con vacunasbasadas en virus inactivado. Existen varias desventajas relacionadas con laproducción y el uso de tales vacunas, entre las que están la reintroducción de laenfermedad debida a la manipulación de grandes masas virales o a la incorrectainactivación del virus, por lo que el desarrollo de vacunas recombinantes másseguras aparece como una alternativa de gran interés. En el presente trabajo seestudió la posibilidad de expresar sitios antigénicos simples y complejos derivadosdel VFA en diferentes sistemas de expresión. La poliproteína P1, precursora de lasproteínas estructurales del virus, pudo expresarse con éxito en un sistemabacteriano y en el sistema “baculovirus-células de insecto”. Sin embargo, lasdiferentes versiones de esta proteína no fueron capaces de montar una respuestaefectiva contra el VFA,probablemente debido a un incorrecto plegamiento espacial. Por otro lado, el sitio antigénico inmunodominante (sitio A) presente en el loop V-Hde la proteína VP1 se expresó con éxito como fusión a la proteína transportadoracore del virus de la hepatitis B (VHB) en células de insecto infectadas conbaculovirus recombinantes. Esta proteína quimérica no adoptó Ia estructuramultimérica esperada, la que se consiguió mediante coinfecciones con unbaculovirus que expresaba la proteína core. De todos modos, las partículasobtenidas resultaron pobres inmunógenos cuando se inyectaron en animalesexperimentales, hecho debido probablemente a la baja densidad de epitopesderivados del VFA en las preparaciones vacunales. Finalmente, tanto el sitio A como la poliproteína P1 pudieron expresarse comofusión a la glicoproteína gp64 del baculovirus AcNPV. Estas proteínas quiméricasse localizaron tanto en la membrana de células infectadas como en la superficie delos baculovirus recombinantes. Esta localización asegura una conformación particulada sobre un soportefosfolipídico (características relacionadas con el aumento de inmunogenicidad desitios antigénicos) y facilita la purificación de los inmunógenos. Cuando sevacunaron ratones con estas construcciones, los baculovirus llevando el sitio A ylas células infectadas con éstos despertaron una respuesta inmune humoralneutralizante contra el VFA, aún en ausencia de adyuvantes. De nuevo, lasconstrucciones llevando P1 fallaron para montar una respuesta inmune humoralneutralizante, probablemente debido a un incorrecto plegamiento espacial. La posibilidad de producir baculovirus recombinantes y células infectadas quelleven en sus superficies sitios antigénicos derivados de patógenos de interésveterinario mediante infección de larvas puede convertirse en una manera sencilla yeconómica de producción de vacunas de nueva generación.

Abstract:

Foot-and-mouth disease (FMD)is an economically very important disease of cattleand other farm animals. It is caused by a picornavirus, foot-and-mouth disease virus (FMDV).The control is achieved by slaughter of infected and contact animals andsystematic vaccination with inactivated virus-based vaccines. Although these vaccines have been effective in controlling the disease, there are anumber of concerns about their production and use, such as the risk ofreintroduction of the disease by handling of infectious virus or incompleteinactivation of the antigen. These disadvantages have led to efforts to develop saferrecombinant vaccines using genetic engineering. In the present work, the possibility of expressing simple and complex antigenic sitesfrom FMDV in different expression systems has been assessed. P1 polyprotein, theprecursor of the four capsid proteins, has been successfully expressed in bacteriaand insect cells. However, different versions of this protein failed to elicit a protectiveimmune response to FMDV,probably due to an incorrect folding of the protein. Onthe other hand, immunodominant site A, located at the G-H loop of VP1, wassuccessfully expressed as a fusion protein with the core protein of hepatitis B virus (HBV)in the baculovirus system. However, this chimaeric protein failed to adopt theexpected multimerio conformation. Interestingly, multimerio particles were obtainedby coinfections with a recombinant baculovirus expressing the wild type coreprotein, but the hybrid core particles obtained resulted poor immunogens in mice,probably due to low FMDV epitope density present in the particles. Finally, both site A and P1 polyprotein could be expressed as fusion proteins withbaculoviral glycoprotein gp64 of baculovirus AcNPV. These chimaeric proteinslocalized in the membrane of the infected insect cells as well as onto the surface ofrecombinant baculoviruses. This localization ensures a particulate conformation ona phospholipidic layer (both characteristics related to an increase of immunogenicityof simple antigenic sites) and facilitates the purification of immunogens. Experimental mice inoculated with gp-site A fusion protein expressed both in thesurface of recombinant baculoviruses or in the membrane of infected cells elicited aspecific humoral immune response with neutralizing activity against FMDV,even inthe absence of adjuvants. Similar constructions bearing gp-P1 fusions failed to elicita humoral immune response with neutralizing activity when inoculated in mice. The expression of antigens from veterinary pathogens with economic importance onthe surface of baculovirus and infected cells by infecting insect larvae could be analternative, safe method to reduce the costs of this kind of vaccines.

Citación:

---------- APA ----------

Taboga, Oscar Alberto. (2000). Expresión de antígenos derivados del virus de la fiebre aftosa en diferentes sistemas eucarióticos. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3255_Taboga

---------- CHICAGO ----------

Taboga, Oscar Alberto. "Expresión de antígenos derivados del virus de la fiebre aftosa en diferentes sistemas eucarióticos". Tesis Doctoral, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 2000.https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3255_Taboga

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