Registro:
| Documento: | Tesis Doctoral |
| Título: | Metabolismo de L-arginina en Trypanosoma cruzi |
| Autor: | Pereira, Claudio Alejandro |
| Editor: | Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |
| Lugar de trabajo: | Instituto de Investigaciones en Ingeniería Genética y Biología (INGEBI)
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| Publicación en la Web: | 2017-03-01 |
| Fecha de defensa: | 1999 |
| Fecha en portada: | 1999 |
| Grado Obtenido: | Doctorado |
| Título Obtenido: | Doctor en Ciencias Biológicas |
| Departamento Docente: | Departamento de Biología |
| Director: | Flawiá, Mirtha María |
| Idioma: | Español |
| Tema: | biología/biología molecular y celular
biología/parasitología
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| Formato: | PDF |
| Handle: |
https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3140_Pereira |
| PDF: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/tesis/tesis_n3140_Pereira.pdf |
| Registro: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/tesis/document/tesis_n3140_Pereira |
| Ubicación: | BIO 003140 |
| Derechos de Acceso: | Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Pereira, Claudio Alejandro. (1999). Metabolismo de L-arginina en Trypanosoma cruzi. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3140_Pereira |
Resumen:
A partir de los resultados obtenidos en nuestro laboratorio sobre la modulación de la motilidad de los epimastigotes de Trypanosoma cruzi a través de los distintos efectores de la ruta metabólica del óxido nítrico, se planteó la necesidad de estudiar en forma más amplia el metabolismo del sustrato de la óxido nítrico sintasa, la L-arginina. Inicialmente se describió el transporte de este aminoácido en epimastigotes de T.cruzi en fase logaritmica de crecimiento. Se determinaron los parámetros cinéticos ysus características bioquímicas, siendo algunas de las más relevantes, las que se detallan a continuación: - El transportador presenta una alta afinidad por el sustrato (Km = 4.16 μM) encomparación con otros sistemas similares. - Es sumamente específico ya que no se inhibe competitivamente en presencia de aminoácidos naturales como así tampoco por análogos estructurales de la arginina. Sólo se observó una disminución significativa en la incorporación de L-arginina en presencia de homoarginina, canavanina y D-arginina. - Es saturable por sustrato, independiente de Na+, pero dependiente de ATP. - Es afectado en forma específica por el tiempo de "ayuno"de L-arginina. Cuando se estudió el destino de la arginina incorporada a las células en 30 minutos, se observó que el 4.3% se incorpora a proteínas, el 68.6% queda formando partedel conjunto de aminoácidos libres y un 27.1% se identificó como fosfoarginina. La presencia de fosfoarginina como fosfágeno involucrado en la regeneración del ATP, hidrolizado principalmente en el flagelo del parásito, explica probablemente la necesidad de un transportador específico de las características descriptas. La relevancia de esta actividad biológica como posible blanco terapéuticotripanosomicida está dada por ser éste un sistema diferencial entre el parásito y elhospedador humano, quien carece de esta enzima pues utiliza la creatina comofosfágeno. Estas evidencias nos llevaron a centrar el interés del trabajo en el sistematransportador de arginina y la enzima arginina kinasa. En la segunda parte del trabajo se caracterizó bioquímicamente la enzima argininakinasa. Se midió la actividad enzimática tanto in vivo como In vitro, se determinó sulocalización subcelular y sus parámetros cinéticos (Km para arginina, 0.33 mM ypara ATP 0.31 mM). Se purificó parcialmente la actividad arginina kinasa en dospasos cromatográficos, uno de intercambio iónico y el segundo de filtraciónmolecular. También se estudiaron sus requerimientos de ATP y cationes bivalentes. Se ensayaron in vitro inhibidores potenciales de la enzima, siendo los másrelevantes,el análogo natural canavanina, la homoarginina y la histidina. Se analizó también la presencia de la arginina kinasa en otros organismos, encontrándose dicha actividaden otras cepas y especies del género Trypanosomay también en los denominados “trypanosomátidos inferiores" como Herpetomonas y Leptomonas. Finalmente se clonó el gen que codifica para la arginina kinasa de T. cruzi utilizando técnicas de reacción en cadena de la polimerasa (PCR)y rastreo en bibliotecasgenómicas. El gen de 1074 pb codifica para una proteína de 357 aminoácidos y unpeso molecular de 40 kDa (GenBank # AF070451),el cual probablemente se encuentre como copia única dentro del genoma. El análisis de la secuencia obtenida demuestra un alto grado de conservaciónevolutiva. El gen completo de la enzima se expresó en un sistema heterólogo (Escherichia coll) demostrándose actividad arginina kinasa de la proteína recombinante.
Citación:
---------- APA ----------
Pereira, Claudio Alejandro. (1999). Metabolismo de L-arginina en Trypanosoma cruzi. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3140_Pereira
---------- CHICAGO ----------
Pereira, Claudio Alejandro. "Metabolismo de L-arginina en Trypanosoma cruzi". Tesis Doctoral, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 1999.https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3140_Pereira
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