Registro:
| Documento: | Tesis Doctoral |
| Disciplina: | quimica |
| Título: | Estudio del rol de la proteína en el desarrollo y progresión del melanoma humano |
| Autor: | Ledda, María Fernanda |
| Editor: | Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |
| Filiación: | Fundacíon Campomar. Instituto de Investigaciones Bioquímicas (IIB)
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| Publicación en la Web: | 2017-03-01 |
| Fecha de defensa: | 1999 |
| Fecha en portada: | 1999 |
| Grado Obtenido: | Doctorado |
| Título Obtenido: | Doctor en Ciencias Químicas |
| Director: | Podhajcer, Osvaldo L. |
| Idioma: | Español |
| Tema: | biología/biología molecular y celular
biología/biomedicina
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| Formato: | PDF |
| Handle: |
http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3126_Ledda |
| PDF: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/tesis/tesis_n3126_Ledda.pdf |
| Registro: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/tesis/document/tesis_n3126_Ledda |
| Ubicación: | Dep.BIO 003126 |
| Derechos de Acceso: | Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Ledda, María Fernanda. (1999). Estudio del rol de la proteína en el desarrollo y progresión del melanoma humano. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3126_Ledda |
Resumen:
SPARC (Secreted Protein Acidic and Rich in Cysteine) es una proteína extracelularasociada a tejidos que presentan altas tasas de proliferación celular y remodelación de lamatriz. En este trabajo se muestra que las lineas celulares de melanoma humano IIB-MEL-LES, IIB-MEL-IAN e IIB-MEL-J así como varios melanomas humanos metastásicosexpresan altos niveles de la proteína y del ARNm de SPARC. Mediante análisis por Western Blot, detectamos una única banda de 42 kDa secretada in vitro por fibroblastosdiploides humanos y un doblete de 40 a 45 kDa secretado por las tres líneas celulares demelanoma y en todos los melanomas metastásicos testeados. Algunas de las muestras demelanomas y de las líneas celulares mostraron un doblete adicional de 34-36 kDa. El ARNmde SPARC fue detectado por ensayos de northern blot en las tres líneas de melanomaestudiadas, en las l4 muestras de melanomas metastásicos y en los tumores inducidos enratones atímicos. El patrón heterogéneo de SPARC secretado por las células de melanomahumano es resultado de la glicosilación post-traduccional y de un clivaje extracelularespecífico. A diferencia de lo que sucede con los fibroblastos humanos, las células demelanoma no sobreexpresaron SPARC luego del agregado de TGF-β. El análisisinmunohistoquímico demostró que SPARC se expresó fuertemente en el 100% de losmelanomas primarios (7/7) y metastásicos (29/29), con moderación en la mayoría de losnevos displásicos positivos (13/14) y débilmente en los nevos benignos (4/25). No se detectóexpresión de SPARC en melanocitos normales. Los datos sugieren que la expresión de deesta proteína está asociada a la progresión neoplásica del melanoma humano. En el presentetrabajo también se describe la supresión parcial de la expresion de SPARC en 2 líneas demelanoma humano utilizando un vector de expresión con la secuencia antisentido para SPARC. La reducción de los niveles de expresión de esta proteína dio como resultado unareducción en la capacidad adhesiva e invasiva in vitro de las células tumorales sobremembranas basales reconstituídas, eliminando completamente su capacidad tumorigénica invivo. Esta es la primera evidencia de que SPARC desempeña un papel clave la progresióndel melanoma humano.
Abstract:
SPARC (Secreted Protein Acidic and Rich in Cysteine) is an extracellular proteinassociated with tissues exhibiting high rates of cell proliferation and matrix remodelling. Thepresent work shows that the human melanoma cell lines IIB-MEL-LES, IIB-MEL-IAN and IIB-MEL-J and different human metastatic melanomas expressed high levels of SPARCmRNA and protein. By western blot analysis we detected a unique secreted 42 kDa band inhuman diploid fibroblast-conditioned medium and a 40 to 45 kDa doublet in the threemelanoma cell lines and all the metastatic melanomas tested. Part of the melanoma samplesand cell lines showed an additional doublet of 34-36 kDa. SPARC mRNA was expressed bythe three established cell lines, 14 metastatic melanoma samples, and tumors raised in nudemice, and no spliced variants were found. The heterogeneous pattern of SPARC secreted byhuman melanoma cells is the result of post-translational glycosilation and specificextracellular cleavage. Unlike human fibroblasts, melanoma cells did not over express SPARC upon addition of TGF-β. Immunohistochemical analysis showed that SPARC wasstrongly expressed in 100 % of primary melanomas (7 of 7) and metastatic melanomas (29of 29), moderately expressed in most of the positive dysplastic nevi (13 of 14), and onlyweakly expressed in nevocellular nevi (4 of 25). Normal melanocytes did not express SPARC. The data suggest that the expression of SPARC is associated with the neoplasticprogression of human melanoma. The present study also reports that the suppression of SPARC expression by 2 human melanoma cell lines using a SPARC antisense expressionvector, results in significant decrease in the in vitro adhesive and invasive capacity of tumorcells, completely abolishing their in vivo tumorigenicity. This is the first evidence that SPARC plays a key role in human melanoma development and progression.
Citación:
---------- APA ----------
Ledda, María Fernanda. (1999). Estudio del rol de la proteína en el desarrollo y progresión del melanoma humano. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3126_Ledda
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Ledda, María Fernanda. "Estudio del rol de la proteína en el desarrollo y progresión del melanoma humano". Tesis Doctoral, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 1999.https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n3126_Ledda
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