Registro:
| Documento: | Tesis Doctoral |
| Disciplina: | biologia |
| Título: | Identificación y análisis molecular de una cepa hipervirulenta de PVX, PVX MS y estudio de las modificaciones postraduccionales de la proteína de Capside de PVX |
| Autor: | Tozzini, Alejandro Carlos |
| Editor: | Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |
| Filiación: | Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Instituto de Biotecnología
|
| Publicación en la Web: | 2017-03-01 |
| Fecha de defensa: | 1997 |
| Fecha en portada: | 1997 |
| Grado Obtenido: | Doctorado |
| Título Obtenido: | Doctor en Ciencias Biológicas |
| Director: | Hopp, Horacio Esteban |
| Idioma: | Español |
| Formato: | PDF |
| Handle: |
http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n2992_Tozzini |
| PDF: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/tesis/tesis_n2992_Tozzini.pdf |
| Registro: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/tesis/document/tesis_n2992_Tozzini |
| Ubicación: | Dep.BIO 002992 |
| Derechos de Acceso: | Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Tozzini, Alejandro Carlos. (1997). Identificación y análisis molecular de una cepa hipervirulenta de PVX, PVX MS y estudio de las modificaciones postraduccionales de la proteína de Capside de PVX. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n2992_Tozzini |
Resumen:
Hasta el momento sólo una cepa de PVX capaz de replicar en genotipos portadores de algunos de los genesde resistencia extrema Rx ha sido descripta, esta el la cepa HB. En el presente trabajo describimos laidentificación de una nueva cepa con características de hipervirulencia aislada en Argentina; esta cepa, PVX MS, es capaz de replicar en genotipos Rxacl. La detección inmunológica con anticuerpos monoclonales mostróque la cepa MS pertenece al serotipo PVX° (común o europeo) mientras que la cepa HB corresponde alserotipo PVXᴬ(andino). El análisis comparativo por western blotting de las proteínas de cápside (CP) dediferentes cepas mostró que PVX MS se distingue por su movilidad electroforética, lo cual fue confirmadopor secuenciación nucleotídica. Debido a que la CP está involucrada en varios aspectos de la interacción virus-planta, incluída la virulencia, seestudió el gen de la CP de la cepa MS. Este gen no contiene los mismos determinantes de virulencia presentesen PVX HB. Estos resultados sugieren que otras regiones virales están también involucradas en la virulencia. El análisis del genoma completo de PVX MS, respecto de otras cepas, mostró que éste presenta tres regionesexclusivas localizadas en los ORFs 1, 2 y 3, candidatas a ser responsables de la hipervirulencia de PVX MS. Por otro lado, el estudio de la CP condujo a descubrir que esta proteína es una glicoproteína. El gen de la CPde todas las cepas de PVX codifica para una proteína de 25 kDa. El análisis de las CPs por SDS-PAGEmuestra un peso molecular aparente de 27 a 30 kDa, dependiendo de la cepa, pero la identidad amino acídicaentre algunas cepas es muy alta como para explicar las diferencias de movilidad entre ellas. La CP de seiscepas fueron analizadas mediante oxidación con periodato, tratamiento con ácido trifluometano-sulfónico,digestión con glicosidasas, reconocimiento por lectinas, tratamiento alcalino suave (β-eliminación) y porespetroscopía de masa de las regiones amíno y carboxi terminales, indicando la presencia de O-glicosilacionesen ambos extremos. Sin embargo, estas modificaciones post-traduccionales no parecen determinar diferenciasde virulencia entre cepas de PVX.
Abstract:
Just one PVX strain, PVX HB, was described as being able to replicate bearing the extreme resistance genes Rx until now. Here we report a new resistance-breaking isolate in Argentina, PVX MS , that multiplies ingenotypes carrying the Rxacl gene. Immunoblot detection with specific monoclonal antibodies showed that PVX MS belongs to the serotype PVX° (common or European strain), whereas PVX HB is included in theserotype PVXᴬ (Andean), which was confirmed by nucleotide sequencing. Western blotting of the coatproteins of different PVX strains showed that PVX MS differed in mobility in SDS-PAGE. Since the PVX coat protein (CP) is involved in many aspects of plant-virus interaction including thevirulence, we studied the coat protein gene of PVX MS. This gene does not show the virulence determinantsreported for PVX HB. These results suggest that other regions of the viral genome are also involved invirulence determination. The analysis of the complete PVX MS genome shows three regions located at ORFsl, 2 and 3 that are only found in this strain. These regions could be responsible of the PVX MS virulence. On the other side, the study of the coat protein leaded us to discover that this protein is a glycoprotein. Thecoat protein gene of all the strains of potato virus X codes for a protein of 25 kDa. Analysis of the CP by SDS-PAGE shows a migration mobility of 27 to 30 kDa, depending on the strain, but the amino acid identityis too high to explain such difference in the migration. The CP of six PVX strains were analysed by periodateoxidation, trifluoromethanesulfonic acid, digestion with glycosydases, recognition by lectins, mild alkalinetreatment (β-elimination) and mass spectroscopy of the N- and C- terminal regions, indicating the presenceof O-linked sugars in both ends. These post-transcriptional modifications seem to have no effect on PVXvirulence.
Citación:
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Tozzini, Alejandro Carlos. (1997). Identificación y análisis molecular de una cepa hipervirulenta de PVX, PVX MS y estudio de las modificaciones postraduccionales de la proteína de Capside de PVX. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n2992_Tozzini
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Tozzini, Alejandro Carlos. "Identificación y análisis molecular de una cepa hipervirulenta de PVX, PVX MS y estudio de las modificaciones postraduccionales de la proteína de Capside de PVX". Tesis Doctoral, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 1997.https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n2992_Tozzini
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