Mecanismo de acción de ACTH : purificación, caracterización y función del sustrato endógeno de la Proteína Quinasa AMPc dependiente

Del Valle Paz, Cristina

Registro:

Documento:	Tesis Doctoral
Disciplina:	biologia
Título:	Mecanismo de acción de ACTH : purificación, caracterización y función del sustrato endógeno de la Proteína Quinasa AMPc dependiente
Título alternativo:	Mechanism of action of ACTH : purification, characterisation and function of the endogenous substrate of the cAMP-dependent Protein Quinase
Autor:	Del Valle Paz, Cristina
Editor:	Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales
Lugar de trabajo:	Facultad de Medicina. Departamento de Bioquímica Humana
Publicación en la Web:	2017-03-01
Fecha de defensa:	1996
Fecha en portada:	1996
Grado Obtenido:	Doctorado
Título Obtenido:	Doctor en Ciencias Biológicas
Departamento Docente:	Departamento de Biología
Director:	Podestá, Ernesto Jorge
Idioma:	Español
Palabras clave:	ACTH; PROTEÍNA QUINASA AMPC DEPENDIENTE; ESTEROIDOGÉNESIS; ZONA FASCICULATA; FOSFOLIPASA A2ACTH; CAMP-DEPENDENT PROTEIN KINASE; STEROIDOGENESIS; ADRENAL ZONE FASCICULATA; PHOSPHOLIPASE A2
Formato:	PDF
Handle:	http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n2890_DelVallePaz
PDF:	https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/tesis/tesis_n2890_DelVallePaz.pdf
Registro:	https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/tesis/document/tesis_n2890_DelVallePaz
Ubicación:	BIO 002890
Derechos de Acceso:	Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Del Valle Paz, Cristina. (1996). Mecanismo de acción de ACTH : purificación, caracterización y función del sustrato endógeno de la Proteína Quinasa AMPc dependiente. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales). Recuperado de http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n2890_DelVallePaz

Resumen:

Trabajos previos sugerían la presencia en tejidos esteroidogénicos deuna proteína soluble ACTH-y AMPc-dependiente capaz de estimular lasíntesis de esteroides. En este trabajo se describe la purificación ahomogeneidad de esta proteína y su caracterización. Apartir de zona fasciculata de adrenales de ratas tratadas con ACTH,y mediante cromatografías en columnas de DEAE-celulosa, Sephadex G-100, Mono Q-HPLC y Superosa-HPLC y un procedimiento de elución deproteínas de geles de poliacrilamida, se purificó una proteína de 43 kDa (p43) capaz de estimular "in vitro" la síntesisde esteroides. El efecto de p43es dosis dependiente y es bloqueado por inhibidores de la fosfolipasa A2 (PLA2). La microsecuenciación peptídica demostró que p43 es una proteínanovel. Anticuerpos anti-péptidos sintéticos bloquearon la actividadesteroidogénica de p43, lo que demuestra que la secuencia determinadacorresponde a la proteína bioactiva. Ademas todos los anticuerposobtenidos reconocieron a la proteina desnaturalizada.p43 es una fosfoproteína con varios sitiosde fosforilación y el gradode fostorilación de la misma se halla bajo control hormonal, lo cual sugiereque la fosforilación de p43 se produce a través de mecanismos queinvolucran la activación de la proteína quinasa AMPc dependiente (PKA)mediada por ACTH. p43 puede ser fosforilada "in vitro" por PK A, lo cualrefuerza la hipótesis planteada. Se concluye que p43 es una novel fosfoproteína intermediaria en laestimulación de la sintesis de esteroides inducida por ACTH y que sumecanismo de acción posiblemente involucre, directa o indirectamente, laactivación de una PLA2.

Abstract:

Previous reports have suggested the presence of a soluble protein thatresponds to CAMP signals to induce steroid synthesis in adrenocortical tissue. This work describes the purification of this protein from adrenal zonefasciculata cells and its characterisation. A five-step procedure that includes DEAE-cellulose, gel filtration, Mono Q and Superose-HPLC, and elution of theprotein from SDS-PAGE was used. This procedure results in the purification tohomogeneity of a protein of 43 kDa molecular mass which retains thecapacity to stimulate steroid synthesis in an "in vitro" recombination assay. The stimulatory effect of p43 is dose-dependent and is inhibited by the use ofphospholipase A2 inhibitors.p43 was subjected to aminoacid microsequencing. A series ofantibodies was generated against synthetic peptides that match some ofthe partial sequences obtained from p43. Some of the antibodies block thesteroidogenic activity of p43, demonstrating that the sequence correspondsto the bioactive protein. The antibodies bind also to the protein in itsdenatured form.p43 is a phosphoprotein exhibiting various phosphorylation sites, and itsphosphorylation status is under hormonal control. These observationssustained by the fact that p43 can be phosphorylated "in vitro" by cAMP dependentprotein kinase. It is concluded that p43 is a novel phosphoprotein, intermediary in thestimulation of steroid synthesis induced by ACTH, and that its mechanism ofaction involves, either directly or indirectly, the activation of PLA2.

Citación:

---------- APA ----------

Del Valle Paz, Cristina. (1996). Mecanismo de acción de ACTH : purificación, caracterización y función del sustrato endógeno de la Proteína Quinasa AMPc dependiente. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n2890_DelVallePaz

---------- CHICAGO ----------

Del Valle Paz, Cristina. "Mecanismo de acción de ACTH : purificación, caracterización y función del sustrato endógeno de la Proteína Quinasa AMPc dependiente". Tesis Doctoral, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 1996.https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n2890_DelVallePaz

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