Registro:
| Documento: | Tesis Doctoral |
| Título: | Metabolismo de poliaminas en tripanosomátidos : Ornitina decarboxilasa de Leishmania mexicana |
| Autor: | Sanchez, Cecilia Palmira |
| Editor: | Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |
| Lugar de trabajo: | Instituto de Investigaciones Bioquímicas "Fundación Campomar"
|
| Publicación en la Web: | 2017-03-01 |
| Fecha de defensa: | 1993 |
| Fecha en portada: | 1993 |
| Grado Obtenido: | Doctorado |
| Título Obtenido: | Doctor en Ciencias Biológicas |
| Departamento Docente: | Departamento de Biología |
| Director: | Algranati, Israel David |
| Idioma: | Español |
| Formato: | PDF |
| Handle: |
http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n2603_Sanchez |
| PDF: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/tesis/tesis_n2603_Sanchez.pdf |
| Registro: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/tesis/document/tesis_n2603_Sanchez |
| Ubicación: | BIO 002603 |
| Derechos de Acceso: | Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Sanchez, Cecilia Palmira. (1993). Metabolismo de poliaminas en tripanosomátidos : Ornitina decarboxilasa de Leishmania mexicana. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales). Recuperado de http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n2603_Sanchez |
Resumen:
Las poliaminas son compuestos esenciales para el crecimiento yla proliferación celular: por este motivo se realizan grandes esfuerzospara la búsqueda de inhibidores selectivos de la biosíntesis de estas sustancias con el objeto de detener el crecimiento de células tumorales, así como de los microorganismos causantes de infecciones. Estudios recientes han propuesto el empleo de inhibidores de la biosíntesis de putrescina como una herramienta terapéutica útil para controlar el crecimiento de parásitos intracelulares. Por esta razón sedecidió estudiar el metabolismo de poliaminas en Trypanosoma cruziy Leishmania mexicana con el fin de encontrar diferencias en la biosíntesis de estos policationes entre el protozoo y la célula del mamífero huesped con el objeto de encontrar blancos específicos que al ser inhibidos determinen el bloqueo de la proliferación permitiendo desarrollar nuevas estrategias quimioterápicas contra el Mal de Chagas y la Leishmaniasis. Se ha observado que los niveles intracelulares de poliaminas en T.cruzi en su forma epimastigote correlacionan con la fase decrecimiento. La putrescina, espermidina, espermina y cadaverina alcanzan los valores máximos en la etapa logarítmica y luego disminuyen hacia la fase estacionaria de crecimiento. En L. mexicanase observó un resultado similar pero en este parásito sólo se detect óputrescina y espermidina. La captación de poliaminas y sus probables precursores (ornitina, arginina y lisina) por T. cruzi y L. mexicana, como laconversión in vivo de dichos aminoácidos en poliaminas sugierenque en los tripanosomas la mayor parte de estas sustancias son transportadas al interior de las células desde el medio externo, mientras que en Laishmania parece prevalecer la biosíntesis de los policationes a partir de ornitina. Se determinó que los extractos de L. mexicana poseen una alta actividad de Ornitina decarboxilasa (ODC). Se caracterizaron los requerimientos para la máxima actividad catalítica, así como diferentes propiedades de la enzima en relación a su estructura y la regulación de su actividad. La adición de cicloheximida y de poliaminas a los cultivos mostraron que la ODC de L. mexicana es estable y que su degradación no es regulada por poliaminas. La ODC es inhibida tanto in vivo como in vitro por la adición de a DFMO. Se observó que la actividad enzimática es fuertemente dependiente de la presencia de su coenzima, el piridoxal 5'-fosfato. La enzima preparada en presencia de concentraciones saturantes de PLP es más resistente a la inactivación por efecto de la temperatura y es menos sensible a la acción de inhibidores. Por otra parte, se observó que la enzima obtenida en ausencia del cofactor contiene PLP endógeno, ya que la remoción total de la coenzima por tratamiento con hidroxilamina produce la apoenzima inactiva, la cual requiere PLP para recobrar su actividad enzimáticamediante una unión que parece inducir cambios conformacionales dela proteína. Probablemente, la ODC no presenta homología estructural en sus regiones antigénicas con la enzima aislada de células animales, yaque no se observó reacción cruzada cuando se inmunoprecipitó la OCDdel parásito con un anticuerpo policlonal contra ODC de riñón de ratón. La enzima se purificó parcialmente a partir de promastigotes de L. mexicana mediante la precipitación con acetona ycromatografías de intercambio iónico en DEAE Sepharosa, dehidroboficidad en Phenyl Superosa, de exclusión molecular en Superosa 6 y en fase reversa con una columna C4, lográndose una purificación de 2300 veces. Los análisis en geles desnaturalizantes de poliacrilamida y decromatografía en Sephacryl S-200 indican que la subunidad proteica o el principal producto de su proteólisis tendría un peso molecular aparente de 60 kDa, mientras que el de la proteína nativa sería de aproximadamente 200 kDa. listos resultados sugirirían que la ODC estaría formada por tres o cuatro subunidades.
Citación:
---------- APA ----------
Sanchez, Cecilia Palmira. (1993). Metabolismo de poliaminas en tripanosomátidos : Ornitina decarboxilasa de Leishmania mexicana. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n2603_Sanchez
---------- CHICAGO ----------
Sanchez, Cecilia Palmira. "Metabolismo de poliaminas en tripanosomátidos : Ornitina decarboxilasa de Leishmania mexicana". Tesis Doctoral, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 1993.https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n2603_Sanchez
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