Registro:
Documento: | Tesis Doctoral |
Disciplina: | biologia |
Título: | Obtención y caracterización de plantas de papa transgénicas para genes de interés agropecuario |
Autor: | Vas, Mariana del |
Editor: | Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |
Lugar de trabajo: | Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA-Castelar). Centro de Investigación en Ciencias Veterinarias (CICV). Instituto de Biología Molecular
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Publicación en la Web: | 2017-03-01 |
Fecha de defensa: | 1993 |
Fecha en portada: | 1993 |
Grado Obtenido: | Doctorado |
Título Obtenido: | Doctor en Ciencias Biológicas |
Departamento Docente: | Departamento de Biología |
Director: | Hopp, Horacio Esteban |
Idioma: | Español |
Formato: | PDF |
Handle: |
http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n2567_DelVas |
PDF: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/tesis/tesis_n2567_DelVas.pdf |
Registro: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/tesis/document/tesis_n2567_DelVas |
Ubicación: | BIO 002567 |
Derechos de Acceso: | Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Vas, Mariana del. (1993). Obtención y caracterización de plantas de papa transgénicas para genes de interés agropecuario. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales). Recuperado de http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n2567_DelVas |
Resumen:
La papa es el cuarto cultivo en orden de importancia mundial luego del trigo, el maíz y elarroz. El cultivo resulta seriamente afectado por virus, insectos y malezas que aumentanlos costos de producción, reducen el rendimiento y la calidad y obligan al uso deagroquímicos. La técnica de transformación mediada por Agrobacterium tumefacienspermite la transferencia de genes de interés agronómico al fondo genético de loscultivares apreciados por el productor sin modificación del mismo. Se utilizó esta técnicapara la obtención de plantas resistentes al virus del enrollamiento de la hoja (PLRV), alataque por larvas de la polilla del tomate y al herbicida total fosfmotricina. l) Resistencia a PLRV por expresión del gen de la cápside. Para realizar el clonado del gen de cápside viral, asi como también parte de los extremos 5' y 3' no codificantes aledaños a este gen, se amplificó el fragmento de interés por latécnica de PCR usando RNA total de planta infectada como templado. Esto evita lapurificación viral, que es particularmente dificil en el caso de PLRV que replicasolamente en células de floema y acompañantes. Se secuenció el fragmento en estudio,encontrándose entre 89 y 53 % de homologías (a nivel de nucleótidos) con las secuenciasde cápsides de aislamientos recientemente publicados. Se construyó un vector binariorecombinante, de manera que el gen de cápside de PLRV quedara bajo la regulación deun promotor y un terminador adecuados para la expresión de este gen en plantas. Utilizando la técnica de transformación de hoja mediada por Agrobacterium previamentepuesta a punto para un cultivar de uso local (Huinkul-MAG), se obtuvieron 84 plantastransgénicas. Se confirmó que algunas expresaban el mRNA de el gen de cápside por Northern blot. Asimismo, se hizo un ensayo de multiplicación viral (cuantificada por ELISA) en plantas transgénicas y control (sin transformar) infectadas mediante áfidosque previamente se habían alimentado en plantas de papa con infección secundaria de PLRV. 2) Resistencia a insectos por expresión de la toxina de Bacillus thuringiensis (BT). La plantas transgénicas Alfa l y Alfa 2 fueron el resultado de la transformación delcultivar Alfa de papa con un vector que lleva el gen que codifica para la toxina de BTbajo el control de un promotor inducible por daño. Se confirmó que el gen de interésestaba integrado en el genoma por Southern blot, y que se expresaba por Northern blot. Para determinar si las plantas Alfa l y Alfa 2 presentaban actividad insecticida frente aun lepidóptero minador, se hicieron ensayos de actividad biológica estudiando lasensibilidad de larvas de polillas de tomate (Scrobipalpuloides absoluta Meyrik) frente ala toxina que estas plantas, teóricamente expresan. A las dos semanas de la eclosión delas larvas, se observaron galerías y larvas vivas tanto en las hojas de las plantastransgénicas como en los controles sin transformar. Si embargo el daño observado (tamaño y número de galerías) en las plantas transgénicas fue considerablemente menorque el registrado en las plantas control. Asimismo el desarrollo de las larvas criadassobre plantas transgénicas fue menor que el observado en las plantas control ya que noalcanzaron el estadío de pupa, y por lo tanto tampoco el de adulto, lo que sí ocurriónormalente en las plantas control. 3) Resistenicia a fosfinotricina (PPT, principio activo del herbicida total Basta® ) porexpresión de una enzima detoxificante. Se obtuvo una planta transgénica (llamada AE2) que expresa el gen bar que codificapara una enzima capaz de inactivar a la fosfinotricina por acetilación. AE2 presentóresistencia a fosfinotricina tanto in vitro como in vivo.
Citación:
---------- APA ----------
Vas, Mariana del. (1993). Obtención y caracterización de plantas de papa transgénicas para genes de interés agropecuario. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n2567_DelVas
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Vas, Mariana del. "Obtención y caracterización de plantas de papa transgénicas para genes de interés agropecuario". Tesis Doctoral, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 1993.https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n2567_DelVas
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