Registro:
| Documento: | Tesis Doctoral |
| Disciplina: | biologia |
| Título: | La ribonucleasa P DE Bacillus subtilis : una enzima con un ARN catalítico |
| Autor: | Reich, Claudia Irene |
| Editor: | Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |
| Filiación: | Universidad de Indiana
|
| Publicación en la Web: | 2017-03-01 |
| Fecha de defensa: | 1988 |
| Fecha en portada: | 1988 |
| Grado Obtenido: | Doctorado |
| Título Obtenido: | Doctor en Ciencias Biológicas |
| Director: | Pace, Norman R. |
| Idioma: | Español |
| Formato: | PDF |
| Handle: |
http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n2169_Reich |
| PDF: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/tesis/tesis_n2169_Reich.pdf |
| Registro: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/tesis/document/tesis_n2169_Reich |
| Ubicación: | Dep.BIO 002169 |
| Derechos de Acceso: | Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Reich, Claudia Irene. (1988). La ribonucleasa P DE Bacillus subtilis : una enzima con un ARN catalítico. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n2169_Reich |
Resumen:
La ribonucleasa P es la enzima responsable de madurar el término 5' de losprecursores de los ácidos ribonucleicos de transferencia (ARNt). Eneubacterias, consta de dos componentes, uno proteico y uno ribonucleico (Stark et al., 1978). El gen que define el componente ribonucleico de la ARNasa P de Bacillus subtilís fue clonado y su secuencia determinada. In vivoy en condiciones fisiológicas in vitro, ambos componentes son necesarios paraefectuar catálisis. Sin embargo, a altas concentraciones de iones mono- ydivalentes, el ARN por sí solo es capaz de procesar los pre-ARNt; (Guerrier-Takadaet al., 1983); el gen clonado en un vehículo de expresión que contieneel promotor de bacteriófago T7 permite la síntesis in vitro de un ARN queretiene propiedades catalíticas. Las altas concentraciones de cationesnecesarias para manifestar la actividad del ARN P cumplen la función decontrarrestar la repulsión electrostática entre el ARN enzima y el ARNsustrato, y así permitir el íntimo contacto requerido para la catálisis. Esto seha demostrado en el análisis cinético de la reacción catalizada por el ARN Psolo; a medida que aumenta la concentración de cationes, el Km de la reaccióndisminuye, consistente con la mayor afinidad de la enzima por su sustrato aelevada fuerza iónica; pero la reacción es muy lenta. La posibilidad que labaja velocidad de la reacción se deba a la disociación lenta del producto de lasuperficie de la enzima se infiere de dos hechos: primero, la enzima no parecediscriminar entre precursor y producto maduro (Ki =~ Km); y segundo, elanálisis de la reacción temprana evidencia un primer ciclo rápido de clivaje. La preincubación de la enzima con ARNt maduro inhibe este primer ciclo;probablemente el ARNt no se disocia rápidamente impidiendo el acceso desustrato. Por lo tanto, in vitro el paso limitante en la reacción por el ARN Pes la disociación del producto de la superficie de la enzima. La reaccióncatalizada por la holoenzima no presenta este comportamiento; el producto sedisocia rápidamente de la enzima una vez efectuada la catálisis. La influencia de la secuencia 3' terminal CCA sobre el procesamiento deltérmino 5' fue también investigada. Con este fin, se construyeron sustratosque la contienen o no, a partir de precursores que in vivo la contienencodificada en el gen o no. El análisis cinético de la reacción sobre estossustratos evidencia que la secuencia CCA provee un sitio de contacto entre elsustrato y la enzima, posiblemente participando en una unión hidrógeno. El análisis filogenético hizo posible derivar un modelo de estructurasecundaria para el ARN P. Este modelo se basó en la comparación de lassecuencias para el ARN P en eubacterias Gram positivas y Gram negativas (purpúreas). El modelo es satisfactorio en el sentido que permite identificarun núcleo de elementos conservados, a pesar de la gran divergencia enestructura primaria. Es en este núcleo común que los elementos necesariospara el reconocimiento del sustrato y para la catálisis probablemente residan. Esta hipótesis fue evaluada experimentalmente construyendo in vitro un "minigen" que, clonado en un vehículo de expresión adecuado, permite lasíntesis de un ARN que consta sólo de estos elementos conservados y cuyotamaño es 2/3 del tamaño del ARN P in vivo. Se demostró que esta versiónreducida del ARN P retiene actividad catalítica.
Citación:
---------- APA ----------
Reich, Claudia Irene. (1988). La ribonucleasa P DE Bacillus subtilis : una enzima con un ARN catalítico. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n2169_Reich
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Reich, Claudia Irene. "La ribonucleasa P DE Bacillus subtilis : una enzima con un ARN catalítico". Tesis Doctoral, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 1988.https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n2169_Reich
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