Resumen:
En un trabajo anterior Parodi (1) determinó el fósforo inorgániooy orgánico presente en el liquido alantoideo de huevoe degallina embrionados, inoculados con virus de influenze tipo A yencontró un descenso significativo de le fosfocreatina y del fósforototal. El presente trabajo continua esos estudios determinando fósforoinorgánico de fosfocreatia, ATP y ácido soluble total, enmúsculo de ratones blancos inoculadoe con virus de influenza, cepa Formosa. Materiales y Métodos. Animales: Se usaron ratones blancos adultos. Un lote se inoculóip. con 0,2 m1 de líquido alantoideo normal y otro con 0.2 m1de líquido alantoideo infectado con virus de influenza, cepa Formosa,cuyo título hemoaglutinante era 1:1280¡ un tercer lote seinoculó con 0.2 ml de una mezcle de virus y antisuero totalmenteneutralizada segun pruebes de infectividad en embriones. Estosanimales se sacrificaron a las 24, 48 y 72 hs. luego de la inoculaciónanestesiándolos oon pentotal y sumergiéndolos luego en unamezcla de nieve carbónica-éter. Mientras estaban congelados seles extrajo músculo que se pesó en una balanza de torsión y luegose trató con Cl3CCOOH Al 5% en Frío. Se filtró por un tubo de Barber y sobre este liquido libre de proteÍnas se hicieron leesiguientes determinaciones de fósforo. Determinación del fósforo: a) Fósforo inorgánico: Se llevó a cabo según el método de Lowryy Lopez (2) b) Fósforo de fosfocreatina: se dejó el filtrado libre de proteínasdurante l bora a temperatura ambiente y sobre una partealícuota se determinó fósforo según el método de Fiske-Subbarow (3). c) Fósforo de ATP: igual que el anterior pero se hizo previamenteuna hidrólisis de 10 minutos a 100°C en HCl 1N. d)Fósforo ácido soluble total: igual que el anterior pero eehidrolizó 3 hs. a 100°C en ClH 1N. Determinación del glucógeno muscular: Se trató un trozo de músculo de ratones obtenidos como anteriormentecon KOH al 30% en caliente, luego se precipitó glucógenocon l,l volumen de alcohol absoluto, se determinó y luegose hidrolizó en medio ácido. Se determinó glucosa según elmétodo de Valverde (4). Obtención del antisuero específico: Se inoculó un conejo adulto por vía intramuscular con 0,5mL de líquido alantoideo infectado con virus de influenzc más 1 m1 de adjuvante de Freund. Se lo sangró por punción cardíacaa los 15 dias y se obtuvo el suero. Determinación de infectividad en músculo: Se tomó una porción del músculo de le pata de ratones inoculadoscon virus de influenza, se maceró con caldo con antibiótico. (penicilina y estreptomicina), se centrifugó y se usóel sobrenadante. Este se inoculó en diluciones 10^-1, 10^-2, 10^-3, 10.^-4, 10^-5 en cavidad alantoidea de embriones de pollo de 11días de incubación. Los embriones se mantuvieron 24 hores a 37°C y luego se mataron por frío y se extrajo liquido alantoides,con el que se realizó una reacción de hemoaglutinación. Resultados: En la Tabla I se presentan los promedios,las desviacionesstandard, y los valoren de t (para el ensayo t) para lasdeterminaciones de ésteres fosforados. *Ver tabla en tesis* A las 24, 48 y 72 horas de la inoculación se observa un descenso significativo de la fosfocreatina, ATP y fósforo total. Esto no ocurre en los animales controles. Los valores de glucógeno muscular se dan en la Tabla II. *Ver tabla en tesis* No se observan variaciones en el contenido del glucógeno muscularde los ratones infectados. Los extractos de músculo de los ratones infectados con virusque fueron inoculados en embriones de pollo no demostraron poseerninguna actividad infecciosa. Discución El virus de influenza provoca cambios metabólicos en loshuespedes en los cuales desarrolla. En huevoss de gallina embrionadasse han encontrado variaciones en el volumen del líquido alantoideo,de su pH, del peso de la membrana corioalantoidea y de laglicólisis anaerobia de la membrana corioalantoidea. Unade las alteraciones más importantes es la detención desu desarrollo, fenómeno que se ha relacionado con el metabolismodel fósforo y sus ésteres, eapecialmente de la fosfocreatina y del ATP. Pappalardo (6) encuentra un aumento en 1a cantidad total decreatinina y creatina en el líquido alantoideo de embriones infectados. Parodi observa una notable disminución de la rostecreatinaen los embriones infectados que comienza a las 4 hs., seacentúa a las 7 hs. y vuelve a sun valores normales a las 24 hs.luego de la inoculación. Tambien observa un descenso del fósforoinorgánico y del fósforo ácido soluble total. En este trabajo se trató de observar si existían alteracionessimilares en ratones infectados intraperitonealmente con el virusde influenza. Se ha encontrado un descenso significativo del fósforo provenientede la fosfocreatina y del ATP,así comodel fósforo ácidosoluble total. Los valores hallados en ratones inoculados con liquido alantoideono infectado no muestran variaciones con respecto a losnormales, salvo en un caso (a las 48 hs. el fósforo del ATP aumenta)al cual no lo atribuimos significado. Las determinacionos de virus infeccioso en el músculo delanimal infectado han dado resultado negativo; tampoco co ha encontradovariación en los valores del glucógeno muscular aunqueéstos oscilan, en todos los casos, dentro de limites muy amplios. Siendo la fosfocreatina la fuente de fosfatos para la resíntesisdel ATP una disminución en los valoren de ambos hace pensaren la inhibición del proceso de síntesis de la primera que sereflejaría también en los valores del segundo. Un efecto análogo se encuentra en los músculos "envenenados"con iodoacetato en los cuales desaparece la fosfocreatina, aunquese encuentra un aumento del fósforo inorgánico y de la creatina. Este efecto se atribuyo a la inhibición de la gliceraldehido-3fosfato deshidrogenasa y al bloque de la resíntesis del ATP apartir del ATP. Dado que en el músculo no se encuentra virus infecciosos sepuede pensar que éste ejerce una acción tóxica que se manifiestade esta manera. Dicha acción podría deberse a la partícula en sio bien a alguna subunidad derivada de ella. Es conocida la toxicidadque tiene el virus de influenza. Hasta hace poco se pensabaque dicha toxicidad se debia a 1a partícula completa, pero enun reciente trabajo Kato y Okada han desintogrado el virus porultrasonido y han encontrado que a pesar de la perdida de infectividad, la toxicidad no disminuye y en algunos casos aumenta. Sugieren que la acción tóxica se debería a una proteina o lipoproteínafuertemente adherida a la hemoaglutinina, aunque partede ella permanece unida al antígeno. Una observación semejante de acción tóxica quo provoca undescenso de la fosfocreatina es el hallado por Pinchot y Blocval inocular toxina diftérica en ratas por vía subcutánea. De todas maneras, las experiencias anteriores indican quela noción tóxica es neutralizada por el antisuero específico. Encambio en este trabajo no se consiguió neutralizar el descensodel fósforo por la inyección simultánea del virus y del antisueroneutralizente, salvo en el caso del fósforo total. Esto podria explicarse si el descenso del fósforo se debieraa subunidades derivadas de la partícula viral y contra lascuales no hubiera anticuerpos en el conejo, a pesar de que elvirus se descompone en unidades menores al infectar las célulaso tejidos. Por otra parte se debe tener en cuente uns posible accióndebida al interferon. Se sabe que las células normales a lascuales se les agrega interferon aumentan su consumo de 02 así como suproducción de ac. láctico, pero el proceso de glicólisisqueda desconectado de la producción de ATP, pensándose que lafalta de este último es un factor importante en la acción del interferonfrente a los virus, dado que ellos precisan del ATP parasus procesos sintéticos. Podemos pensar entonces que nuestrosdescensos del ATP y fosfocreatina pueden ser causados por la accióndel interferon que fabricaría el animal el ser inoculado opor su presencia en el líquido alantoideo infectante. Conclusiones: 1.- Se hicieron determinaciones del fósforo inorgánico, del de fosfocreatina, ATP y ácido soluble total en ratones blancos inoculados con virus de influenza y en controles inoculados con líquido alantoideo normal. 2.- Se observó un descenso significativo en la fosfocreatina, ATP y fósforo total. 3.- Se discuten los resultados obtenidos y se propone su interpretación.
Citación:
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Barcelona de Guerrero, Lucía. (1961). Alteraciones en los esteres fosfóricos del músculo de ratones infectados con virus de influenza. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n1107_BarcelonadeGuerrero
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Barcelona de Guerrero, Lucía. "Alteraciones en los esteres fosfóricos del músculo de ratones infectados con virus de influenza". Tesis Doctoral, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 1961.https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n1107_BarcelonadeGuerrero
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