Registro:
Documento: | Tesis Doctoral |
Disciplina: | quimica |
Título: | Estudios preliminares sobre la secuencia de los aminoácidos en el citocromo c de corazón de caballo |
Autor: | Schejter, Abel |
Editor: | Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |
Filiación: | Universidad Hebrea de Jerusalem. Escuela de Medicina "Hadassah". Departamento de Investigación del Cáncer
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Publicación en la Web: | 2017-11-06 |
Fecha de defensa: | 1957 |
Fecha en portada: | 1957 |
Grado Obtenido: | Doctorado |
Título Obtenido: | Doctor en Ciencias Químicas |
Director: | Margoliash, Emanuel |
Idioma: | Español |
Formato: | PDF |
Handle: |
http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n0933_Schejter |
PDF: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/tesis/tesis_n0933_Schejter.pdf |
Registro: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/tesis/document/tesis_n0933_Schejter |
Ubicación: | Dep.000933 |
Derechos de Acceso: | Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Schejter, Abel. (1957). Estudios preliminares sobre la secuencia de los aminoácidos en el citocromo c de corazón de caballo. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de http://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n0933_Schejter |
Resumen:
En la primera parte se exponen brevemente los antecedentes del descubrimiento y primeros estudios sobre el citocromo c, y se resume el estado actual de los conocimientos acerca de su estructura. En la parte experimental se da cuenta de los trabajos realizados, cuyoresumen es el siguiente: 1) Se obtuvo citocromo c a partir de músculo de corazón de caballo por unmétodo clásico. La preparación obtenida se liofilizó y se purificó por cromatografía sobre columna de Amberlite IRC-50, resina de intercambio catiónico; se obtuvieron varias fracciones, empleandose para los estudios realizados la primera de ellas según el orden de elución. 2) Se llevó a cabo la hidrólisis con tripsina, en razón de los datos conocidos acerca de su especificidad con respecto a los carboxilos de lisina y arginina. Los productos de la hidrólisis fueron separados por electroforesis sobre papel de filtro a pH 6,5. Sobre los electroforetogramas se ejecutaron reacciones de péptidos en general y reacciones específicas de arginina, histidina, tirosina y triptofano. Los péptidos obtenidos fueron separados nuevamente por cromatografía bidimensional sobre papel; una vez eluidos se los sometió a la hidrólisis en medio ácido. Los productos de la hidrolisis total fueron cromatografiados bidimensionalmente sobre papel e identificados los aminoácidos componentes. Una fracción electroforética denominadaneutra fué dejada para un trabajo posterior. 3) El número total de péptidos obtenido sobrepasa al que hubiera podidoesperarse de la especificidad de la tripsina, teniendo en cuenta análisissobre número total de aminoácidos en el citocromo c. Lo mismo ocurre paragran parte de los aminoácidos. Se sometió luego la mezcla de péptidos quese obtiene de la hidrólisis tripsínica a la separación por cromatografía sobre columna de Dowex-50, resina de intercambiador catiónico, mediante una elución en gradiente continuo del pH. Se obtuvo de este modo una curva en la cual hay 17 picos. En el mismo laboratorio se hallan en progreso actualmente análisis de estructura de estos péptidos (Feitelson, Margoliash y Frowirth, comunicación personal). 4) De los resultados obtenidos por la separación electroforética y cromatográfica sobre papel puede extraerse la conclusión de que en el citocromo de músculo de corazón de caballo existen por lo menos dos residuos de cisteína aparte de los dos que se hallan presentes en el "core" de la molécula sirven para mantener la cadena peptídica unida al grupo porfirínico. El número de histidinas, por otra parte, es de cuatro: una de ellas se halla en el "core" y está directamente relacionada con la formación del hemocromógeno. El número de argininas de la molécula es de cuatro por lo menos. 5) La molécula de citocromo c fupe sometida a la degradación escalonadaa partir del aminoácido nitrógeno terminal por la acción del fenilisotiociánico. Se confirmó que el primer término de la cadena está constituido por la histidina, tal como se hallara empleando el método del fluordinitrobenceno (Margoliash, 1955) y en contradicción con otro trabajo (Matsubara, Hagihara, Horio y Okunuki, 1957) que señala la presencia de un residuo de arginina en dicho lugar de la molécula. 6) La degradación debe detenerse al llegar al segundo ciclo pues se produce una ruptura de la cadena que se atribuye al ataque del fenilisotiociánico sobre los grupos -amino de las numerosas lisinas que contiene la molécula. 7) Al estado presente de las investigaciones, la molécula de citocromo c de músculo de corazón de caballo puede ser descripta por el siguiente esquema: (ver esquema en la tesis). 8) En el laboratorio donde se realizó este trabajo se ejecutan actualmentenuevas investigaciones para completar el conocimiento de la secuencia de aminoácidos del citocromo c de músculo de corazón de caballo, determinar laestructura espacial de la molécula, establecer las causas de la formacióndel hemocromógeno e interpretar, a la luz de estos resultados, el mecanismode la actividad enzimática de la molécula.
Citación:
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Schejter, Abel. (1957). Estudios preliminares sobre la secuencia de los aminoácidos en el citocromo c de corazón de caballo. (Tesis Doctoral. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n0933_Schejter
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Schejter, Abel. "Estudios preliminares sobre la secuencia de los aminoácidos en el citocromo c de corazón de caballo". Tesis Doctoral, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 1957.https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n0933_Schejter
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