Registro:
| Documento: | Tesis de Grado |
| Título: | Efecto de las urolitinas sobre la angiogénesis en la endometriosis |
| Título alternativo: | Effect of urolithins on angiogenesis in endometriosis |
| Autor: | Simone, Julieta Alejandra |
| Editor: | Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |
| Lugar de trabajo: | Fundación del Instituto de Biología y Medicina Experimental - CONICET. Instituto de Biología y Medicina Experimental (IBYME)
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| Fecha de defensa: | 2025-04-28 |
| Fecha en portada: | 28 de Abril de 2025 |
| Grado Obtenido: | Grado |
| Título Obtenido: | Licenciado en Ciencias Biológicas |
| Departamento Docente: | Departamento de Biodiversidad y Biología Experimental |
| Director: | Bilotas, Mariela Andrea |
| Jurado: | Fontana, Vanina Andrea; Chiappini, Florencia Ana; Beltrame, Jimena Soledad |
| Idioma: | Español |
| Palabras clave: | UROLITINAS; ANGIOGENESIS; ENDOMETRIOSISUROLITHINS; ANGIOGENESIS; ENDOMETRIOSIS |
| Formato: | PDF |
| Handle: |
http://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO001802_Simone |
| PDF: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/seminario/seminario_nBIO001802_Simone.pdf |
| Registro: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/seminario/document/seminario_nBIO001802_Simone |
| Ubicación: | Dep.BIO 001802 |
| Derechos de Acceso: | Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Simone, Julieta Alejandra. (2025). Efecto de las urolitinas sobre la angiogénesis en la endometriosis. (Tesis de Grado. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de http://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO001802_Simone |
Resumen:
La endometriosis es una enfermedad ginecológica benigna que se caracteriza por la presencia de tejido endometrial fuera de la cavidad uterina. Se trata de una enfermedad inflamatoria, crónica, estrógeno dependiente y multifactorial cuyos principales síntomas son el dolor y la infertilidad. Las urolitinas son una subfamilia de metabolitos producidos por la microbiota intestinal a partir de elagitaninos y ácido elágico. Los principales metabolitos producidos en humanos son la urolitina A (UA), y la urolitina B (UB). En nuestro laboratorio demostramos por primera vez que el tratamiento in vivo con UB disminuye el tamaño de las lesiones endometriósicas mientras que la UA evita el desarrollo de las lesiones por completo en un modelo murino de endometriosis. Siendo que la formación de nuevos vasos sanguíneos es crucial para el establecimiento, desarrollo y mantenimiento de las lesiones endometriósicas, este trabajo de tesis tiene como objetivo investigar el rol de la UA y la UB sobre la angiogénesis en la endometriosis. Para esto tratamos a la línea celular endometriósica 12z con UA, UB o en condiciones basales y analizamos la expresión del ARNm de distintos factores proangiogénicos por RT-qPCR. Además evaluamos el porcentaje de área vascularizada y el número de vasos sanguíneos en lesiones endometriósicas de ratones Balb/c tratados con UB mediante inmunohistoquímica para CD31. Finalmente ensayamos la acción de los medios condicionados de las células 12z tratadas con UA y UB, así como el efecto directo de las mismas, sobre la angiogénesis en el ensayo de membrana corioalantoidea (CAM) de codorniz. Observamos que el tratamiento con UA provocó una disminución significativa en los niveles de expresión del ARNm de VEGFa (p<0,05), RHOJ (p<0,001), FGF2 (p<0,05), IL1b (p<0,001) e IL6 (p<0,05) en las células 12z en comparación con el basal. Mientras que la UB disminuyó significativamente la expresión del ARNm de RHOJ e IL1b (p<0,05), aunque en menor medida que UA (p<0,01 UA vs. UB). No se observaron cambios significativos en las expresión de HIF1a (p>0,05 UA y UB vs. Basal). Además las lesiones endometriósicas de ratones tratados con UB presentaron una disminución significativa del porcentaje del área vascularizada (p<0,05) y el número de vasos sanguíneos (p<0,05). En el modelo de CAM de codorniz los medios condicionados de las células 12z tratados con UA y UB no tuvieron efectos significativos sobre la angiogénesis, aunque la acción directa de UA provocó un aumento en el número de ramificaciones de vasos sanguíneos (p<0,05 vs. Basal) y UB no tuvo efecto. Como parte complementaria de esta tesis, se llevó a cabo la optimización del ensayo de CAM de codorniz, con el objetivo de mejorar la eficiencia del método y posibilitar la medición de parámetros adicionales relacionados con el desarrollo vascular. Esta optimización estuvo orientada a facilitar la segmentación automatizada de la vasculatura a partir de imágenes, permitiendo así un análisis más profundo y reproducible. En primer lugar, se perfeccionó la técnica de cultivo ex ovo, lo que resultó en un incremento del 69% en la supervivencia embrionaria al final del experimento en comparación con el método previamente utilizado (p<0,01). Además, se implementó una nueva modalidad de administración del estímulo angiogénico, la cual favoreció una mejor visualización y segmentación de los vasos sanguíneos, habilitando su análisis cuantitativo posterior. Como conclusión de esta tesis podemos decir que aunque las urolitinas reducen la expresión de factores proangiogénicos en las células endometriósicas, su impacto funcional sobre la angiogénesis sigue siendo incierto y se requieren más estudios para esclarecer su efecto en el contexto de esta enfermedad compleja y multifactorial. Asimismo, logramos optimizar el ensayo de CAM de codorniz, mejorando la eficiencia del método y abriendo la posibilidad de realizar análisis automatizados y más profundos de la vasculatura.
Abstract:
Endometriosis is a benign gynecological disease characterized by the presence of endometrial tissue outside the uterine cavity. It is a chronic, inflammatory, estrogen-dependent, and multifactorial condition, with pain and infertility as its main symptoms. Urolithins are a subfamily of metabolites produced by the gut microbiota from ellagitannins and ellagic acid. The main metabolites produced in humans are urolithin A (UA) and urolithin B (UB). In our laboratory, we demonstrated for the first time that in vivo treatment with UB reduces the size of endometriotic lesions, while UA completely prevents their development in a murine model of endometriosis. Since the formation of new blood vessels is crucial for the establishment, development, and maintenance of endometriotic lesions, this thesis aims to investigate the role of UA and UB in angiogenesis in endometriosis. To this end, we treated the endometriotic cell line 12z with UA, UB, or under basal conditions and analyzed the mRNA expression of various proangiogenic factors using RT-qPCR. Additionally, we evaluated the percentage of vascularized area and the number of blood vessels in endometriotic lesions of Balb/c mice treated with UB using immunohistochemistry for CD31. Finally, we assessed the action of conditioned media from 12z cells treated with UA and UB, as well as their direct effects, on angiogenesis in the quail chorioallantoic membrane (CAM) assay. We observed that UA treatment significantly reduced mRNA expression levels of VEGFa (p<0.05), RHOJ (p<0.001), FGF2 (p<0.05), IL1b (p<0.001), and IL6 (p<0.05) in 12z cells compared to basal conditions, while UB significantly decreased RHOJ and IL1b expression (p<0.05), although to a lesser extent than UA (p<0.01 UA vs. UB). No significant changes were observed in HIF1a expression (p>0.05 UA and UB vs. basal). Furthermore, endometriotic lesions in UB-treated mice showed a significant reduction in the percentage of vascularized area (p<0.05) and the number of blood vessels (p<0.05). In the quail CAM model, conditioned media from UA- and UB-treated 12z cells had no significant effects on angiogenesis, although the direct effect of UA led to an increase in the number of blood vessel branches (p<0.05 vs. basal), while UB had no effect. As a complementary part of this thesis, the quail chorioallantoic membrane (CAM) angiogenesis assay was optimized with the aim of improving the efficiency of the method and enabling the measurement of additional parameters related to vascular development. This optimization was designed to facilitate the automated segmentation of the vasculature from images, thereby allowing for a more in-depth and reproducible analysis. First, the ex ovo culture technique was refined, resulting in a 69% increase in embryonic survival at the end of the experiment compared to the previously used method (p<0.01). In addition, a new approach for administering the angiogenic stimulus was implemented, which enhanced the visualization and segmentation of blood vessels, enabling subsequent quantitative analysis. In conclusion, although urolithins reduce the expression of proangiogenic factors in endometriotic cells, their functional impact on angiogenesis remains uncertain, and further studies are needed to clarify their effects in the context of this complex and multifactorial disease. Additionally, we successfully optimized the quail CAM assay, improving the efficiency of the method and enabling automated and more detailed vascular analyses.
Citación:
---------- APA ----------
Simone, Julieta Alejandra. (2025). Efecto de las urolitinas sobre la angiogénesis en la endometriosis. (Tesis de Grado. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO001802_Simone
---------- CHICAGO ----------
Simone, Julieta Alejandra. "Efecto de las urolitinas sobre la angiogénesis en la endometriosis". Tesis de Grado, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 2025.https://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO001802_Simone
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