Registro:
| Documento: | Tesis de Grado |
| Título: | Rol de argonauta-1 (AGO1) en la activación de enhancers dependientes de estrógenos |
| Título alternativo: | Role of Argonaute-1 in the activation of estrogen-dependent enhancers |
| Autor: | Abraham, Ezequiel |
| Editor: | Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |
| Lugar de trabajo: | Universidad de Buenos Aires - CONICET. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias (IFIBYNE)
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| Fecha de defensa: | 2025-04-08 |
| Fecha en portada: | Marzo 2025 |
| Grado Obtenido: | Grado |
| Título Obtenido: | Licenciado en Ciencias Biológicas |
| Departamento Docente: | Departamento de Fisiología, Biología Molecular y Celular |
| Director: | Nazer, Ezequiel |
| Director Asistente: | Kornblihtt, Alberto Rodolfo |
| Jurado: | Rubinstein, Natalia; Guberman, Alejandra Sonia; Berardino, Bruno Gabriel |
| Idioma: | Español |
| Formato: | PDF |
| Handle: |
http://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO001796_Abraham |
| PDF: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/seminario/seminario_nBIO001796_Abraham.pdf |
| Registro: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/seminario/document/seminario_nBIO001796_Abraham |
| Ubicación: | Dep.BIO 001796 |
| Derechos de Acceso: | Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Abraham, Ezequiel. (2025). Rol de argonauta-1 (AGO1) en la activación de enhancers dependientes de estrógenos. (Tesis de Grado. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de http://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO001796_Abraham |
Resumen:
El objetivo principal de esta tesis es investigar el papel y el mecanismo molecular de Argonauta-1 (AGO1) en la activación de enhancers dependientes de estrógenos (EDEs). Este proyecto se basa en el estudio publicado en The Journal of Cell Biology en 2020 por el grupo del Dr. Kornblihtt, donde se describió la función nuclear de AGO1 en el cáncer de mama. En dicho trabajo, se demostró que AGO1 interactúa con el receptor de estrógenos α (ERα) y con EDEs en células MCF7 estimuladas con estradiol (E2), promoviendo su activación y facilitando la interacción a larga distancia entre estos enhancers y los promotores de sus genes blanco, lo que impacta en su transcripción. A partir de estos hallazgos, esta tesis se propuso evaluar si AGO1 puede activar EDEs por sí misma cuando es reclutada de manera ectópica, con el objetivo de dilucidar su papel jerárquico en este proceso. Para ello, se diseñó una estrategia basada en CRISPR/dCas9 para dirigir AGO1 específicamente a dos loci respondedores a estrógenos, eNRIP1 y eTFF1, utilizando cuatro sgRNAs diseñados mediante Genome Browser. La funcionalidad de estos sgRNAs se validó en un sistema heterólogo (células HEK293T) mediante transfección con un vector codificante para la proteína de fusión dCas9-VP64, evaluando la activación transcripcional de eRNAs por RT-qPCR.Posteriormente, los sgRNAs validados se emplearon en células HEK293T y MCF7, utilizando un vector diseñado en esta tesis que codifica la proteína de fusión dCas9-AGO1. Los resultados mostraron que AGO1, por sí sola, no es capaz de activar estos EDEs, sino que requiere del contexto cromatínico inducido por la señalización de E2 para potenciar su activación. Esto respalda la noción de AGO1 como un coactivador transcripcional en células tumorales mamarias y sugiere su participación en mecanismos que contribuyen a la progresión del cáncer de mama.
Abstract:
The main aim of this thesis is to study the role and molecular mechanism of argonaute-1 (AGO1) in the activation of estrogen-dependent enhancers (EDEs). The starting point of this project is Dr. Kornblihtt’s group 2020 paper published in the Journal of Cell Biology, in which the nuclear role of AGO1 was assessed in the context of breast cancer. The group described how AGO1 could interact both with the Estrogen Receptor α (ERα) and EDEs in MCF7 cells upon estradiol (E2) treatment. AGO1 recruitment was shown to promote EDEs activation as well as the long-range interaction between these enhancers and the promoter regions of their target genes, impacting their transcription. In this sense, this project seeks to understand the hierarchical role of AGO1 in the activation of estrogen-dependent enhancers. Our hypothesis claims that AGO1 is capable of activating those enhancers when recruited ectopically, facilitating their transcription. To test this, a CRISPR/dCas9 strategy was developed to force the recruitment of AGO1 towards two estrogen-responsive loci, eNRIP1 and eTFF1, mediated by a set of 4 sgRNAs designed using the Genome Browser tool. These sgRNAs were validated in a heterologous system, the HEK293T cell line, transfected with a vector encoding the fusion protein dCas9-VP64, so as to evaluate the capability of these sgRNAs to target those specific regions of the genome, assessing their transcription into eRNA by RTqPCR. Then, the validated sgRNAs were used to conduct experiments in both HEK293T and MCF7 cells, this time employing the dCas9-AGO1 fusion protein encoded in another vector designed as a part of this thesis. The results showed that AGO1 is unable to activate estrogen-dependent enhancers by its own, but requires the presence of the chromatin context provided by the E2 signalling pathway to lead to increased levels of EDE activation. This supports the notion that AGO1 functions as a transcriptional coactivator in breast cancer cells, suggesting its participation in mechanisms leading to tumour onset and progression.
Citación:
---------- APA ----------
Abraham, Ezequiel. (2025). Rol de argonauta-1 (AGO1) en la activación de enhancers dependientes de estrógenos. (Tesis de Grado. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO001796_Abraham
---------- CHICAGO ----------
Abraham, Ezequiel. "Rol de argonauta-1 (AGO1) en la activación de enhancers dependientes de estrógenos". Tesis de Grado, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 2025.https://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO001796_Abraham
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