Registro:
| Documento: | Tesis de Grado |
| Título: | Estudio de la dinámica mitocondrial y la autofagia en modelos neuronales de Mucopolisacaridosis IIIA |
| Título alternativo: | Study of mitochondrial dynamics and autophagy in neuronal models of Mucopolysaccharidosis IIIA |
| Autor: | Saud, Valentina |
| Editor: | Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |
| Publicación en la web: | 2025-09-19 |
| Fecha de defensa: | 2025-03-19 |
| Fecha en portada: | Marzo 2025 |
| Grado Obtenido: | Grado |
| Título Obtenido: | Licenciado en Ciencias Biológicas |
| Departamento Docente: | Departamento de Química Biológica |
| Director: | Porte Alcon, Soledad |
| Director Asistente: | Pomilio, Carlos Javier |
| Jurado: | Fuente, Verónica de la; Mazaira, Gisela Ileana; Sokn, María Clara |
| Idioma: | Español |
| Formato: | PDF |
| Handle: |
http://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO001790_Saud |
| PDF: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/seminario/seminario_nBIO001790_Saud.pdf |
| Registro: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/seminario/document/seminario_nBIO001790_Saud |
| Ubicación: | Dep.BIO 001790 |
| Derechos de Acceso: | Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Saud, Valentina. (2025). Estudio de la dinámica mitocondrial y la autofagia en modelos neuronales de Mucopolisacaridosis IIIA. (Tesis de Grado. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de http://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO001790_Saud |
Resumen:
resulta en la acumulación del glicosaminoglicano (GAG) heparán sulfato (HS) en los lisosomas. A pesar de los avances en la comprensión de la enfermedad, aún no existen tratamientos efectivos para abordar los síntomas neurológicos asociados a la MPS IIIA. En este trabajo se pretende estudiar la dinámica mitocondrial y los procesos de autofagia en modelos neuronales de MPS IIIA generados previamente mediante la técnica de CRISPR-Cas9 a partir de la línea celular HT22, derivada de neuronas hipocampales de ratón. Las sublíneas celulares (12, 15 y 124) aquí empleadas presentan actividad no detectable de la enzima SGSH. En primer lugar, se confirmó la acumulación de GAGs en la línea 124 mediante tinción con azul de dimetil metileno (DMMB). Posteriormente, se analizó la morfología y dinámica mitocondrial, observándose una disminución en el número de redes en las sublíneas 12 y 124. Además, se estudió el balance en la expresión de proteínas asociadas a la fisión y fusión mitocondrial. Resultados preliminares indican que los niveles de expresión de DRP1 aumentan en las fracciones mitocondriales de células deficientes en SGSH, mientras que los niveles de OPA1 no presentan cambios sustanciales. Estos hallazgos sugieren un posible desequilibrio en los procesos de fusión y fisión mitocondrial. El análisis de la ultraestructura celular reveló la acumulación de mitocondrias dañadas y una mayor presencia de vesículas degradativas en las sublíneas. En cuanto a la autofagia, se observó un incremento en el número de vesículas autofágicas LC3-II positivas en la línea 124. Además, se detectó un aumento en la colocalización entre mitocondrias y LC3 en las líneas 12 y 124, indicando que estas organelas se encuentran dirigidas a su degradación mediante mitofagia. En conjunto, estos resultados indican que la deficiencia de SGSH en las sublíneas celulares genera alteraciones en la dinámica mitocondrial y en los procesos de autofagia y mitofagia, lo que contribuye a la disfunción celular observada en la MPS IIIA. La generación y caracterización de estos modelos celulares proporciona una herramienta valiosa para el estudio de los mecanismos patológicos de la enfermedad y para la exploración de nuevas estrategias terapéuticas.
Abstract:
Mucopolysaccharidosis IIIA (MPS IIIA), also known as Sanfilippo Syndrome, is a rare neurodegenerative disease that belongs to the group of lysosomal storage disorders (LSDs). This condition is characterized by mutations in the gene encoding the enzyme heparan-N-sulfatase (SGSH), leading to the accumulation of the glycosaminoglycan (GAG) heparan sulfate (HS) within lysosomes. Despite advances in understanding the disease, there are still no effective treatments to address the neurological symptoms associated with MPS IIIA. In this study, we aim to investigate mitochondrial dynamics and autophagy processes in MPS IIIA neuronal models previously generated using CRISPR-Cas9 genome editing in the HT22 cell line derived from mouse hippocampal neurons. The cellular sublines employed here (12, 15, and 124) exhibit undetectable activity of the SGSH enzyme. First, the accumulation of GAGs in the 124 line was confirmed using dimethyl methylene blue (DMMB) staining. Subsequently, mitochondrial morphology and dynamics were analyzed, observing a decrease in the number of networks in the 12 and 124 cell lines. Additionally, the balance in the expression of proteins associated with mitochondrial fission and fusion was studied. Preliminary results indicate that DRP1 expression levels increase in the mitochondrial fractions of SGSH-deficient cells, while OPA1 levels show no substantial changes. These findings suggest a possible imbalance in mitochondrial fusion and fission processes. Analysis of cellular ultrastructure revealed the accumulation of damaged mitochondria and an increased presence of degradative vesicles in the sublines. Regarding autophagy, an increment in the number of LC3-II-positive autophagic vesicles was observed in the 124 line. Furthermore, enhanced colocalization between mitochondria and LC3 was detected in lines 12 and 124, indicating that these organelles are targeted for degradation via mitophagy. Together, these results indicate that SGSH deficiency in the sublines leads to alterations in mitochondrial dynamics, as well as in autophagy and mitophagy processes, contributing to the cellular dysfunction observed in MPS IIIA. The generation and characterization of these cellular models provide a valuable tool for studying the pathological mechanisms of the disease and for exploring new therapeutic strategies.
Citación:
---------- APA ----------
Saud, Valentina. (2025). Estudio de la dinámica mitocondrial y la autofagia en modelos neuronales de Mucopolisacaridosis IIIA. (Tesis de Grado. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO001790_Saud
---------- CHICAGO ----------
Saud, Valentina. "Estudio de la dinámica mitocondrial y la autofagia en modelos neuronales de Mucopolisacaridosis IIIA". Tesis de Grado, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 2025.https://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO001790_Saud
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