Registro:
| Documento: | Tesis de Grado |
| Título: | Generación de una línea de células madre embrionarias reportera de la expresión de Nanog y localización subcelular de su locus |
| Título alternativo: | Generation of a Nanog expression and Nanog locus subcellular localization reporter embryonic stem cell line |
| Autor: | Aranovich, Melanie |
| Editor: | Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |
| Lugar de trabajo: | Universidad de Buenos Aires - CONICET. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales (IQUIBICEN)
|
| Publicación en la web: | 2025-08-04 |
| Fecha de defensa: | 2024-07-26 |
| Fecha en portada: | 2024 |
| Grado Obtenido: | Grado |
| Título Obtenido: | Licenciado en Ciencias Biológicas |
| Departamento Docente: | Departamento de Química Biológica |
| Director: | Guberman, Alejandra Sonia |
| Director Asistente: | Roberti, Sabrina Lorena |
| Idioma: | Español |
| Formato: | PDF |
| Handle: |
http://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO001785_Aranovich |
| PDF: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/seminario/seminario_nBIO001785_Aranovich.pdf |
| Registro: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/seminario/document/seminario_nBIO001785_Aranovich |
| Ubicación: | Dep.BIO 001785 |
| Derechos de Acceso: | Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Aranovich, Melanie. (2024). Generación de una línea de células madre embrionarias reportera de la expresión de Nanog y localización subcelular de su locus. (Tesis de Grado. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de http://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO001785_Aranovich |
Resumen:
Las células madre embrionarias (CME) son un tipo de célula pluripotente derivado del macizo celular interno del blastocisto. Estas células tienen el potencial de diferenciarse a todos los tipos celulares de un organismo adulto, por lo que son un valioso modelo de investigación y, además, tienen un enorme potencial en el área de la medicina regenerativa. El conocimiento en el área avanzó enormemente en los últimos años; sin embargo, para poder concretar la aplicación terapéutica de estas células de manera segura y eficiente, es necesario conocer en profundidad los mecanismos moleculares que intervienen en el mantenimiento del estado indiferenciado y los mecanismos involucrados en la diferenciación. Los factores de transcripción (FT) Oct4, Sox2 y Nanog son esenciales para la pluripotencia y son el núcleo de una red regulatoria que define la identidad celular. Particularmente, la expresión de Nanog disminuye rápidamente al inicio de la diferenciación, por lo que es un excelente marcador del estado de pluripotencia naïve. En este trabajo nos propusimos generar líneas de CME que puedan ser utilizadas como herramienta para monitorear el estado transcripcional y la localización subnuclear del locus de Nanog, mediante microscopía de fluorescencia en células vivas. Utilizamos el sistema denominado STREAMING-tag que combina diferentes herramientas, tales como CRISPR-Cas9, transposasa PiggyBac, MS2-MCP y TetO-TetR. Para esto, realizamos las preparaciones de los plásmidos a utilizar, incluyendo transformación, preparación de plásmidos a mediana escala y electroforesis de DNA, cultivamos y transfectamos diferentes líneas celulares y realizamos la adquisición y análisis de imágenes de microscopía de epifluorescencia y confocal. De esta manera, hemos utilizado técnicas diversas, adquiriendo manejo de metodologías de simples y más complejas. Destacamos el gran avance que hemos logrado en la generación de una valiosa herramienta consistente en diferentes líneas de CME reporteras para el locus de Nanog y esperamos que los resultados de esta tesis constituyan un gran aporte para complementar y profundizar el estudio de las distintas líneas de investigación de nuestro grupo.
Abstract:
Embryonic stem cells (ESCs) are a type of pluripotent stem cells derived from the inner cell mass of the blastocyst. They have the potential to differentiate into all cell types of an adult organism, which is why they have enormous potential for regenerative medicine. Knowledge in the area has advanced enormously in recent years; however, to succeed in the therapeutic application of these cells safely and efficiently, a deep understanding of the molecular mechanisms involved in maintaining the undifferentiated state and the mechanisms involved in differentiation is still required. The transcription factors (TF) Oct4, Sox2 and Nanog are essential for pluripotency and are the core of a regulatory network that defines cellular identity. Particularly, Nanog expression decreases rapidly at the beginning of differentiation, making it an excellent marker of the naïve pluripotency state. In this work we generated ESC lines that will serve as a tool to monitor the transcriptional status and subnuclear localization of the Nanog locus by fluorescence microscopy in living cells. We used the STREAMING-tag system that combines different tools and systems, including CRISPR-Cas9, the PiggyBac transposase, MS2-MCP, and TetO-TetR. We prepared the plasmids required, including bacteria transformation, midiprep and DNA electrophoresis, we cultivated and transfected different cell lines and we performed image acquisition, fluorescence and confocal microscopy analysis. In summary, in this work we have used diverse techniques, gaining expertise in simple and complex methodologies. We highlight the progress we made in the generation of a valuable tool consisting of different reporter ESCs lines for the Nanog locus and we hope that the results of this thesis will make a significant contribution to the different research lines of our group.
Citación:
---------- APA ----------
Aranovich, Melanie. (2024). Generación de una línea de células madre embrionarias reportera de la expresión de Nanog y localización subcelular de su locus. (Tesis de Grado. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO001785_Aranovich
---------- CHICAGO ----------
Aranovich, Melanie. "Generación de una línea de células madre embrionarias reportera de la expresión de Nanog y localización subcelular de su locus". Tesis de Grado, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 2024.https://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO001785_Aranovich
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