Registro:
| Documento: | Tesis de Grado |
| Título: | Caracterización de variantes génicas en LHX4 y LHX3 halladas en pacientes pediátricos con deficiencia hormonal hipofisiaria |
| Autor: | Chaves Murriello, Augusto |
| Editor: | Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |
| Lugar de trabajo: | Universidad de Buenos Aires - CONICET. Instituto de Fisiología, Biología Molecular y Neurociencias (IFIBYNE)
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| Publicación en la web: | 2025-06-12 |
| Fecha de defensa: | 2024-05-27 |
| Fecha en portada: | Marzo 2024 |
| Grado Obtenido: | Grado |
| Título Obtenido: | Licenciado en Ciencias Biológicas |
| Departamento Docente: | Departamento de Fisiología, Biología Molecular y Celular |
| Director: | Pérez Millán, María Inés |
| Consejero: | D'alessio, Cecilia |
| Jurado: | Di Giorgio, Noelia Paula; Depino, Amaicha Mara; Fernández, Marina Olga |
| Idioma: | Español |
| Formato: | PDF |
| Handle: |
http://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO001713_ChavesMurriello |
| PDF: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/seminario/seminario_nBIO001713_ChavesMurriello.pdf |
| Registro: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/seminario/document/seminario_nBIO001713_ChavesMurriello |
| Ubicación: | Dep.BIO 001713 |
| Derechos de Acceso: | Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Chaves Murriello, Augusto. (2024). Caracterización de variantes génicas en LHX4 y LHX3 halladas en pacientes pediátricos con deficiencia hormonal hipofisiaria. (Tesis de Grado. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de http://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO001713_ChavesMurriello |
Resumen:
La hipófisis es una glándula que actúa como regulador central en mamíferos. Este órgano presenta múltiples tipos de células secretoras de hormonas, cada una expresando diferentes hormonas que desempeñan un papel vital en la regulación de las diferentes glándulas corporales. El hipopituitarismo congénito es una enfermedad que se caracteriza por la deficiencia de al menos una de las hormonas expresadas por la hipófisis. Los casos que se presentan al nacer se conocen como congénitos y a menudo requieren un tratamiento inmediato (Parks 2018). El papel regulador central de la pituitaria, sumado a la presencia de diferentes tipos de células, hace que esta patología muestre fenotipos variados, creando dificultades tanto para su tratamiento como para su diagnóstico (Louise Cheryl Gregory y Dattani 2020). El crecimiento de la biología molecular permitió a los científicos aumentar su comprensión del desarrollo de la hipófisis y los roles que cumplen algunos factores de transcripción clave en este desarrollo, comenzando a dilucidar los orígenes complejos del hipopituitarismo (Fang et al. 2016). En particular, la aparición de técnicas de secuenciación de nueva generación ha permitido obtener información sobre variantes genómicas en pacientes que sufren estas patologías y crear una asociación entre el genotipo de los pacientes y los diferentes fenotipos encontrados. Estos estudios nos otorgan un mejor entendimiento de los mecanismos moleculares detrás de estas enfermedades y ayudan a obtener una mejor caracterización de ellas, así como a ofrecer una herramienta diagnóstica(Fang et al. 2016). Sin embargo, debido a las grandes cantidades de información obtenidas de los estudios de secuenciación, la caracterización funcional de estas variantes no es un asunto trivial (Eichler 2019). En este estudio trabajamos con tres variantes obtenidas de pacientes con hipopituitarismo congénito en un estudio de secuenciación del exoma completo (WES), encontradas en los genes LHX3 y LHX4. Las variantes en estos genes han sido asociadas previamente con casos de CPHD e hipopituitarismo, y ambos genes juegan un papel clave en el desarrollo de la hipófisis (Mullen et al. 2007; McGillivray et al. 2005; Bhangoo et al. 2006; Machinis et al. 2001). Para evaluar los efectos funcionales de estas variantes llevamos a cabo un estudio de gen reportero de luciferasa en células HEK293T. Las mutaciones puntuales encontradas en pacientes fueron introducidas en plásmidos de expresión de LHX3 y LHX4 a través de mutagénesis sitio dirigida y encontramos que dos de las variantes presentaban una menor actividad de transactivación en comparación con la versión tipo wild type. Para completar este estudio, realizamos una evaluación completa de las tres variantes, observando la conservación de esos aminoácidos entre diferentes especies, posibles efectos estructurales y predicciones de patogenicidad in silico.
Abstract:
The pituitary gland is a central regulator in mammalians. This organ presents multiple hormone secreting cell types, each expressing different hormones that play a vital role in regulating the different glands in the body. Hypopituitarism is a condition in which patients present a deficiency of at least one of the hormones expressed by the pituitary, and combined pituitary hormone deficiency (CPHD) is the name for those cases presented with a deficiency of growth hormone and at least one more pituitary hormone. Those cases that present themselves at birth are known as congenital and often require immediate treatment. The central regulatory role of the pituitary added to the presence of different cell types means these pathologies are presented with a multitude of different phenotypes, creating difficulties both for treatment and diagnosis. The growth of molecular biology allowed scientists to understand the pituitary development process and the role played by some key transcription factors and start elucidating the complex origins of this disease (Fang et al. 2016). Further studies have allowed a better insight into the genetic etiology of these pathologies. In particular, the appearance of new-generation sequencing techniques has allowed scientists to obtain information about genomic variants in patients suffering from these pathologies and create an association between the genotype of patients and the different phenotypes presented by them. These studies give us insight into the molecular mechanism behind these diseases and help to obtain a better characterization of them, as well as offering a potential diagnostic tool (Fang et al. 2016). However, due to the massive amounts of information obtained from sequencing study, the functional characterization of these variants is not trivial (Eichler 2019). In this study we work from three variants obtained from congenital hypopituitarism patients in a whole exome sequencing (WES) study, found in genes LHX3 and LHX4. Variants in these genes have been previously associated with cases of CPHD and hypopituitarism, and both these genes play a key role in pituitary development (Mullen et al. 2007; McGillivray et al. 2005; Bhangoo et al. 2006; Machinis et al. 2001). To evaluate the functional effects of these variants on the role of the proteins LHX3 and LHX4 as transcription factors we carried out a dual Luciferase reporter study in HEK293T. Point mutations found in patients were introduced in expression plasmids of LHX3 and LHX4 through site-directed mutagenesis. We found that two variants presented lower transactivation activity relative to the wild-type version. To complete this study, we performed a complete evaluation of the three variants, looking at the conservation of those amino acids across different species, possible structural effects, and in silico pathogenicity predictions.
Citación:
---------- APA ----------
Chaves Murriello, Augusto. (2024). Caracterización de variantes génicas en LHX4 y LHX3 halladas en pacientes pediátricos con deficiencia hormonal hipofisiaria. (Tesis de Grado. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO001713_ChavesMurriello
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Chaves Murriello, Augusto. "Caracterización de variantes génicas en LHX4 y LHX3 halladas en pacientes pediátricos con deficiencia hormonal hipofisiaria". Tesis de Grado, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 2024.https://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO001713_ChavesMurriello
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