Registro:
| Documento: | Tesis de Grado |
| Título: | Análisis de la expresión de la proteína ciclooxigenasa-2 en cultivos infectados con el virus Junín |
| Autor: | Gravano, María Belén |
| Editor: | Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |
| Lugar de trabajo: | Universidad de Buenos Aires - CONICET. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales (IQUIBICEN)
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| Publicación en la web: | 2024-01-09 |
| Fecha de defensa: | 2023-10-27 |
| Fecha en portada: | 27 de Octubre 2023 |
| Grado Obtenido: | Grado |
| Título Obtenido: | Licenciado en Ciencias Biológicas |
| Departamento Docente: | Departamento de Fisiología, Biología Molecular y Celular |
| Director: | Cordo, Sandra Myriam |
| Consejero: | Petrera, Erina |
| Jurado: | Quiroga, María Florencia; De Rossi, María Cecilia |
| Idioma: | Español |
| Formato: | PDF |
| Handle: |
http://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO001658_Gravano |
| PDF: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/seminario/seminario_nBIO001658_Gravano |
| Registro: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/seminario/document/seminario_nBIO001658_Gravano |
| Ubicación: | Dep.BIO 001658 |
| Derechos de Acceso: | Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Gravano, María Belén. (2023). Análisis de la expresión de la proteína ciclooxigenasa-2 en cultivos infectados con el virus Junín. (Tesis de Grado. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de http://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO001658_Gravano |
Resumen:
La ciclooxigenasa-2 (COX-2) es una proteína de expresión inducible, clave en la biosíntesis de ácido araquidónico y prostaglandinas. Es una enzima relevante dentro de la respuesta innata y partícipe de la activación de vías inflamatorias y anti-apoptóticas. Además, diversos trabajos han demostrado la función de esta proteína en distintas infecciones virales. Por ejemplo, virus como hepatitis C, hepatitis B, dengue y SARS-CoV-2 regulan la expresión de COX-2. En estos casos, el aumento de expresión contribuiría tanto a la replicación como a la patogénesis viral, es decir, presenta una función pro-viral. Un único trabajo reportó la regulación negativa del mensajero de esta enzima por la cepa virulenta del arenavirus LCMV-WE, mientras que la cepa no virulenta LCMV-Arm si indujo la expresión del mensajero. Sin embargo, el estudio de COX-2 en la replicación de los arenavirus no ha sido abordado hasta el momento. Por lo tanto, el objetivo de este trabajo fue determinar si la infección con el arenavirus Junín (JUNV) produce un cambio en la expresión de COX-2 en la línea celular humana A549. Se determinaron los niveles de ARNm de COX-2 por RT-PCR y los niveles de expresión de esta proteína por inmunomarcación. Se encontró que el mensajero se incrementó en 2.25 veces a las 24 h p.i., en comparación con los cultivos controles sin infectar. Cuando se estudiaron distintos tiempos de infección se observó que a las 5 h p.i. el número de células positivas para COX-2 no fue significativamente mayor a los valores basales correspondientes al 20%. Sin embargo, a las 48 h p.i. se determinó un incremento significativo de expresión del 40% en los cultivos infectados. Además, se observó que el patrón de expresión de esta enzima en los cultivos infectados fue principalmente citoplasmático y puntillado en comparación con el patrón difuso observado al estimular la expresión de COX-2 con PMA. Por otra parte, para estudiar la función de esta enzima durante el ciclo de replicación de JUNV, se utilizó Etoricoxib, un inhibidor selectivo de COX-2. Se determinó que esta droga no posee actividad virucida sobre JUNV y que la inhibición selectiva de COX-2 reduce la producción viral (UFP/ml) en un 70%. En estas condiciones la viabilidad se mantuvo siempre por encima del 80%, medida por el método de MTT. De estos resultados se puede concluir que la infección con JUNV induce la expresión de la enzima celular COX-2 a partir de las 24 h p.i. en los cultivos infectados. Para el mismo lapso de tiempo la inhibición de su actividad enzimática, con Etoricoxib, reduce significativamente la multiplicación viral. Esto sugiere que COX-2 tiene una función pro-viral, necesaria para el normal desarrollo del ciclo de multiplicación de JUNV. Aunque no se determinó la función específica de COX-2 durante el mismo, se comprobó que la droga no afecta la estructura del virión, es decir no tiene actividad virucida. Más estudios deberán realizarse para determinar la función de esta enzima celular y el significado biológico de su expresión durante la replicación de JUNV y otros arenavirus.
Abstract:
Cyclooxygenase-2 (COX-2) is an inducible expression protein, key in the biosynthesis of arachidonic acid and prostaglandins. It is a relevant enzyme within the innate response and participates in the activation of inflammatory and anti-apoptotic pathways. In addition, various studies have demonstrated the function of this protein in different viral infections. For example, viruses such as hepatitis C, hepatitis B, dengue and SARS-CoV-2 regulate COX-2 expression. In these cases, the increased expression would contribute both to viral replication and pathogenesis, that is, they have a pro-viral function. A single study reported the negative regulation of the messenger of this enzyme by the virulent strain of the arenavirus LCMV-WE, while the non-virulent strain LCMV-Arm did induce the expression of the messenger. However, the study of COX-2 in arenavirus replication has not been addressed so far. Therefore, the objective of this work was to determine if infection with the Junín arenavirus (JUNV) produces a change in the expression of COX-2 in the human cell line A549. COX-2 mRNA levels were determined by RT-PCR and expression levels of this protein by immunostaining. It was found that the messenger was increased 2.25 times at 24 h p.i., compared to uninfected control cultures. When different infection times were studied, it was observed that at 5 h p.i. the number of COX-2 positive cells was not significantly higher than the basal values corresponding to 20%. However, at 48 h p.i. a significant increase in expression of 40% was determined in the infected cultures. In addition, it was observed that the expression pattern of this enzyme in the infected cultures was mainly cytoplasmic and punctate in comparison with the diffuse pattern observed when stimulating the expression of COX-2 with PMA. On the other hand, to study the function of this enzyme during the JUNV replication cycle, Etoricoxib, a selective COX-2 inhibitor, was used. It was determined that this drug does not have virucidal activity against JUNV and the selective inhibition of COX-2 reduces viral production (UFP/ml) by 70%. Under these conditions, the viability was always maintained above 80%, measured by the MTT method. From these results it can be concluded that infection with JUNV induces the expression of the COX-2 cellular enzyme at 24 h p.i. in infected cultures. For the same period of time, the inhibition of its enzymatic activity, with Etoricoxib, significantly reduces viral multiplication. This suggests that COX-2 has a pro-viral function, necessary for the normal development of the JUNV multiplication cycle. Although the specific function of COX-2 was not determined, it was ruled out that the drug does not affect the structure of the virion, that is, it does not have virucidal activity. Further studies will need to be performed to determine the function of this cellular enzyme and the biological significance of its expression during replication of JUNV and other arenaviruses.
Citación:
---------- APA ----------
Gravano, María Belén. (2023). Análisis de la expresión de la proteína ciclooxigenasa-2 en cultivos infectados con el virus Junín. (Tesis de Grado. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO001658_Gravano
---------- CHICAGO ----------
Gravano, María Belén. "Análisis de la expresión de la proteína ciclooxigenasa-2 en cultivos infectados con el virus Junín". Tesis de Grado, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 2023.https://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO001658_Gravano
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