Registro:
Documento: | Tesis de Grado |
Disciplina: | biologia |
Título: | Relevancia de la SUMOilación de Akt en células madre embrionarias : establecimiento del modelo experimental y análisis del efecto sobre la expresión del factor de transcripción Nanog |
Autor: | Francia, Marcos Gabriel |
Editor: | Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |
Filiación: | Universidad de Buenos Aires - CONICET. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales (IQUIBICEN)
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Publicación en la web: | 2022-06-15 |
Fecha de defensa: | 2017-12-13 |
Fecha en portada: | 2017-11 |
Grado Obtenido: | Grado |
Título Obtenido: | Licenciado en Ciencias Biológicas |
Director: | Guberman, Alejandra Sonia |
Director Asistente: | Cosentino, María Soledad |
Idioma: | Español |
Tema: | biología/fisiología animal
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Formato: | PDF |
Handle: |
http://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO001606_Francia |
PDF: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/seminario/seminario_nBIO001606_Francia.pdf |
Registro: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/seminario/document/seminario_nBIO001606_Francia |
Ubicación: | Dep.BIO 001606 |
Derechos de Acceso: | Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Francia, Marcos Gabriel. (2017). Relevancia de la SUMOilación de Akt en células madre embrionarias : establecimiento del modelo experimental y análisis del efecto sobre la expresión del factor de transcripción Nanog. (Tesis de Grado. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de http://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO001606_Francia |
Resumen:
Las células madre embrionarias (CME) son células derivadas del macizo celular interno del blastocisto de mamíferos. Poseen la capacidad de auto-renovarse indefinidamente en cultivo en condiciones adecuadas y pueden dar origen a células derivadas de las tres capas germinales, propiedad conocida como pluripotencia. Existen tres factores de transcripción fundamentales para la regulación génica de las células madre pluripotentes, Oct4, Sox2 y Nanog, que actúan como el núcleo de una red regulatoria modulando la expresión de genes involucrados en el mantenimiento de la pluripotencia y en la diferenciación celular. La vía PI3K/Akt es clave en el mantenimiento de los niveles y actividad de estos factores de transcripción y por lo tanto en el mantenimiento de las células en su estado indiferenciado. El efector de esta vía, la enzima Akt posee varias isoformas y se encuentra ampliamente descripta en la bibliografía. Particularmente, la sobreexpresión de mutantes constitutivamente activas de la isoforma Akt1 es suficiente para el mantenimiento de la pluripotencia en CME. Se conocen varios eventos de modificación post-traduccional que están involucrados en la modulación de la actividad de Akt. Particularmente se ha descripto en los últimos años que la SUMOilación, unión covalente de una pequeña cadena aminoacídica llamada SUMO (small ubiquitin-like modifier), tiene un rol crítico en la regulación de la actividad quinasa de la isoforma Akt1, con consecuencias en el patrón de splicing, la proliferación y el ciclo celular de diferentes tipos celulares. A partir de estos antecedentes, hipotetizamos que la SUMOilación de Akt es relevante para mantener las propiedades fundamentales de CME y está involucrada en su supervivencia y proliferación. En este trabajo de tesis, estudiamos el efecto de esta modificación post-traduccional de Akt1 en la regulación de la expresión del factor de transcripción fundamental en CME, Nanog. En primer lugar, estudiamos el efecto sobre la actividad del promotor de Nanog mediante co-transfección de vectores de expresión de variantes de Akt1 con diferente capacidad de ser SUMOiladas junto con un vector reportero del sistema Luciferasa controlado por el promotor de Nanog. Encontramos una actividad diferencial de este promotor dependiendo del nivel de SUMOilación de Akt1, donde una mayor SUMOilación de Akt1 genera un aumento en la actividad de dicho promotor. Posteriormente, mediante inmunofluorescencia, estudiamos el efecto de la transfección de estas variantes sobre los niveles endógenos de la proteína Nanog. Según resultados preliminares, en las células transfectadas con las variantes de Akt1 cuya SUMOilación es normal o aumentada (wt y E17K), los niveles de Nanog son mayores que en las células sin transfectar. Contrariamente, las células transfectadas con las variantes 2KR o E17K/2KR, cuya SUMOilación se encuentra disminuida, presentan los niveles de Nanog similares a las células sin transfectar. Estos resultados sugirieren que esta modificación post-traduccional de Akt1 podría modular la expresión de Nanog en CME. Por otro lado, para determinar la relevancia de la SUMOilación de Akt1 en la regulación de la proliferación y supervivencia, evaluamos diferentes condiciones para inducir apoptosis en nuestro sistema y pusimos a punto diferentes técnicas para estudiar este proceso. El cultivo de CME en ausencia de la citoquina LIF y de los inhibidores “2i” por un período de hasta 4 días resultó ser una buena condición para inducir apoptosis, detectada tanto por la técnica de DNA Ladder, como por clivaje de PARP-1 y Caspasa 3 mediante Western Blot. En este trabajo nos propusimos estudiar un proceso cuya relevancia en células madre embrionarias aún se desconoce. A su vez, iniciamos una nueva línea de investigación que planeamos continuar a partir de la puesta a punto de los diseños experimentales presentados y de los resultados generados. Esperamos que este proyecto contribuya al conocimiento de los mecanismos moleculares implicados en los procesos básicos de las CME, fundamentales para su futura aplicación en el área de la medicina regenerativa.
Citación:
---------- APA ----------
Francia, Marcos Gabriel. (2017). Relevancia de la SUMOilación de Akt en células madre embrionarias : establecimiento del modelo experimental y análisis del efecto sobre la expresión del factor de transcripción Nanog. (Tesis de Grado. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO001606_Francia
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Francia, Marcos Gabriel. "Relevancia de la SUMOilación de Akt en células madre embrionarias : establecimiento del modelo experimental y análisis del efecto sobre la expresión del factor de transcripción Nanog". Tesis de Grado, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 2017.https://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO001606_Francia
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