Registro:
| Documento: | Tesis de Grado |
| Título: | Participación del sistema monocuclear fagocítico en el Clearance de bacterias GRAM negativas (Escherichia coli 0111:B4) : influencia de los anticuerpos específicos : papel de los polimorfonucleares neutrófilos (PMN) |
| Autor: | Miliani de Marval, Paula Lucía |
| Editor: | Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |
| Fecha de defensa: | 1998 |
| Fecha en portada: | Diciembre 1998 |
| Grado Obtenido: | Grado |
| Título Obtenido: | Licenciado en Ciencias Biológicas |
| Departamento Docente: | Departamento de Biología |
| Director: | Palermo, Marina Sandra |
| Idioma: | Español |
| Formato: | PDF |
| Handle: |
http://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO000673_MilianideMarval |
| PDF: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/seminario/seminario_nBIO000673_MilianideMarval.pdf |
| Registro: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/seminario/document/seminario_nBIO000673_MilianideMarval |
| Ubicación: | Dep.BIO 000673 |
| Derechos de Acceso: | Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Miliani de Marval, Paula Lucía. (1998). Participación del sistema monocuclear fagocítico en el Clearance de bacterias GRAM negativas (Escherichia coli 0111:B4) : influencia de los anticuerpos específicos : papel de los polimorfonucleares neutrófilos (PMN). (Tesis de Grado. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de http://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO000673_MilianideMarval |
Resumen:
La depuración o "clearance" de un antígeno, solo o formando parte de un complejo inmune (CI), es un mecanismo central de la respuesta inmune, a través del cual se eliminan partículas extrañas al organismo, sean proteínas o microorganismos. Este proceso depende de diversos factores intrínsecos del microorganismo, como así también de las características del CI formado, como por ejemplo: tamaño carga eléctrica, relación antígeno: anticuerpo, clase de inmunoglobulina, entre otros. Estas variables regulan la velocidad del clearance así como el órgano y tipo celular que participan en el mismo. Del tipo celular involucrado dependen a su vez las consecuencias de tal captación. En este sentido es sabido que el sistema mononuclear fagocítico (SMF) distribuido fundamentalmente en el bazo y el hígado tiene un rol central en la eliminación de CI particulados. Sin embargo, el rol de los polimorfonucleares neutrófilos (PMN) que infiltran Jos órganos de depuración durante una infección no ha sido exhaustivamente analizado. A lo largo del presente trabajo se analizó en un modelo murino la participación del sistema mononuclear fagocitico, en el clearance de Escherichia. coli O111:B4, sola o formando parte de complejos inmunes (CI) y la influencia de Jos anticuerpos específicos de tipo IgG inoculada directamente a la vía sistémica. La combinación de técnicas de marcación con radioactivos y fluorescencia nos permitió analizar cuantitativamente el órgano de captación y la población involucrada respectivamente. Los estudios cinéticos en sangre periférica demostraron que los anticuerpos inducen un marcado aumento en la velocidad de clearance de la bacteria. Esta afirmación es válida no solo cuando la bacteria es sensibilizada in vitro previo a su inoculación sino también cuando el complejo bacteria-anticuerpo se formó in vivo, por inoculación de la bacteria en animales previamente inmunizados. El clearance rápido de la bacteria-anticuerpo de la sangre periférica se correlaciona a su ves con distintos fenómenos: 1) Aumento de la captación de bacteria en pulmón 2) Mayor afluencia de neutrófilos a dicho órgano, expresando una alta capacidad fagocítica. 3) A concentraciones bajas de bacterias, el anticuerpo indujo una mayor sobrevida y una rápida recuperación de los animales. Nuestros resultados también destacaron la alta capacidad bactericida que poseen los PMN respecto a los macrófagos residentes en hígado y bazo. Dado que en estos órganos se observó una alta persistencia de las bacterias a lo largo del tiempo (por lo menos 48 hs.); mientras que en pulmón la desaparición es tan rápida que ya a las 24 hs. prácticamente se ha eliminado el 100% de lo captado (Figuras 3, 4 y 5 respectivamente). Nuestros resultados sugieren que el clearance en pulmón de bacterias sensibilizadas con anticuerpos, depende del reclutamiento de un alto número de PMN al sitio de infección y del proceso de activación de las células fagocíticas inflamatorias. La observación simultánea de que el proceso de eliminación de la bacteria, y la aparición de PMN a los sitios de captación de la misma sugieren fuertemente que los PMN poseen un papel fundamental en la resolución de la infección. En el modelo utilizado, observamos que los PMN que migran a los tejidos provienen del pool de neutrófilos circulantes. La profunda neutropenia observada a los pocos minutos de inoculada la bacteria, se asoció a un aumento en el porcentaje de los PMN en los órganos involucrados en el clearance (Figura 13, 14, 15, 16). Considerando que la activación de complemento conduce a la generación de poderosos estímulos quirniotácticos para el reclutamiento de neutrófilos, evaluamos la participación de este sistema en los fenómenos de clearance. Para ello realizamos inyecciones seriadas de factor anti complementario de veneno de cobra (FVC) (87). A través de este esquema experimental se eliminan los productos generados por la activación del complemento. Los resultados demostraron que el tratamiento con FVC, no modificó sustancialmente el clearance de EA, aunque si bloqueó significativamente el atrapamiento en pulmón. Podemos concluir que en la migración de neutrófilos al pulmón al inocular el complejo bacteria-anticuerpo, los factores de complemento juegan un papel destacado. El hígado y el bazo compensaron la disminución de la captación por los pulmones, no afectando la velocidad de clearance de circulación. Contrariamente el tratamiento con FVC disminuyó significativamente la velocidad de clearance de la bacteria sin sensibilizar, sugiriendo que en este caso, el complemento tendría un papel importante como opsonina de la bacteria, facilitando la adherencia a células macrofágicas y/o neutrófilos. A su vez, ambos resultados vistos en conjunto dan sustento a la hipótesis que los complejos bacteria-anticuerpo son fagocitados por interacción de las IgG con sus RFcy sobre las células del SMF y/o PMN. Para evaluar la participación de las moléculas de adhesión en la migración de neutrófilos en respuesta a la inoculación de bacteria o bacteria-anticuerpo, tratamos a los ratones con anticuerpo monoclonal anti CD 11b/CDl8 antes de los estudios de clearance. Los resultados obtenidos muestran que la captación de bacteria-anticuerpo por el pulmón está disminuida, aunque sin observarse diferencias significativas en la cinética de depuración de sangre periférica. Estos datos sugieren que en la migración de los neutrófilos al pulmón luego de la inoculación de EA, participan activamente los mecanismos dependientes de las adhesinas. Los resultados obtenidos por tratamiento con FVC y anti Mac-1, sugieren que al impedirse a los PMN circulantes migrar al pulmón, los complejos EA se distribuyen en los otros órganos del SMF, hígado y bazo. Debido a que el bloqueo de la migración de neutrófilos al pulmón inhibe la captación de los complejos EA, deducimos que al menos parte de dichos complejos son llevados a dicho órgano post fagocitosis en sangre periférica y que tal vez el mismo proceso de fagocitosis induce cambios en los PMN que afectan su migración dirigiéndolos principalmente a los pulmones. Por último analizamos los efectos biológicos producidos por el complejo bacteria-anticuerpo utilizando diferentes cantidades de bacteria. A bajas dosis de bacteria, el anticuerpo induce un efecto protector en la sobrevida de los animales al compararse con los aquellos inoculados con bacteria sola. En cambio, al aumentar el número de bacterias se observó un efecto tóxico ante la presencia de anticuerpos, dado que la mortalidad fue superior al 50% durante las tres primeras horas, mientras que por inoculación única de bacterias, la mortalidad de los animales se produjo después de las 24 hs. y probablemente sea como consecuencia de un shock séptico. A través de estudios de histopatología pudo determinarse que la presencia de anticuerpos induce una clara afluencia e infiltración de PMN al pulmón induciendo el colapso y pérdida de la citoarquitectura del mismo, con manifestación de fenómenos edematosos, que en conjunto indicarían que la muerte observada pudo deberse a una bronconeumonía o a un shock anafiláctico. Por inoculación de bacterias sola, y en todo el rango de dosis estudiadas para EA, no se observaron ninguno de estos fenómenos descriptos anteriormente. Al tratar previamente a los ratones con diclorometilendifosfonato encapsulado en liposomas (Lip-clod), que a las dosis inoculadas solo elimina a los macrófagos hepáticos y esplémcos, encontramos que la velocidad de clearance solo se modificó en el grupo inoculado con bacterias sin que sea afectada por la presencia de anticuerpos comparados con el control. En ambos grupos la captación en los órganos fue dirigida por los pulmones. Si bien los efectos inducidos por esta droga no modificaron la mortalidad de los animales inoculados con bacteria, fue en cambio, determinante en la sobrevida de aquellos inoculados con EA. Observamos que por eliminación de los macrófagos hepáticos y esplénicos, la sobrevida del grupo EA es del 100 % aún superadas las 72 hs. p.i. Al realizar los estudios de histopatología, se demostró que por tratamiento con Lip-clod si bien el número de neutrófilos en pulmón, fue prácticamente el mismo que en los controles (sin Lip-clod y con EA) los fenómenos de infiltración se vieron marcadamente retardados observándose un número importante de PMN marginales, no vistos en los controles. Esto indicaría que la mortalidad estaría asociada a la infiltración de los PMN al pulmón, los que posiblemente induzcan el daño tisular encontrado en el mismo. Nosotros proponemos que en los ratones inoculados con Lip-clod, los macrófagos alveolares, probablemente no producen el nivel de citoquinas específicas necesarias para la inducción de una expresión aumentada de moléculas de adhesión las cuales podrían luego permitir la posterior extravasación de los PMN a los espacios aéreos. En este contexto, el tratamiento es altamente efectivo en reducir la intensidad de la respuesta inflamatoria y el daño pulmonar asociada con una disminución del influjo de neutrófilos (87). Proponemos que la alta tasa de mortalidad inducida por inoculación de EA podría estar asociada a una anafilaxis debido a la interacción entre IgG I y el receptor para la porción Fe de las IgG de RFcγ.
Citación:
---------- APA ----------
Miliani de Marval, Paula Lucía. (1998). Participación del sistema monocuclear fagocítico en el Clearance de bacterias GRAM negativas (Escherichia coli 0111:B4) : influencia de los anticuerpos específicos : papel de los polimorfonucleares neutrófilos (PMN). (Tesis de Grado. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO000673_MilianideMarval
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Miliani de Marval, Paula Lucía. "Participación del sistema monocuclear fagocítico en el Clearance de bacterias GRAM negativas (Escherichia coli 0111:B4) : influencia de los anticuerpos específicos : papel de los polimorfonucleares neutrófilos (PMN)". Tesis de Grado, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 1998.https://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO000673_MilianideMarval
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