Resumen:
La fibronectina (FN) es una proteína fundamental de la matriz extracelular de los vertebrados. El gen de la fibronectina se transcribe a partir de un único promotor que contiene una secuencia TATA en -25 y sitios regulatorios proximales, entre ellos un elemento de respuesta a AMP cíclico en -170 (CRE-170) y una CCAAT box en -150 (CCAAT-150). Si bien se sabe que la inducción por AMP cíclico (CAMP) está mediada principalmente por elementos del tipo CRE, recientemente se demostró en este laboratorio que el sitio CCAAT está también involucrado. En las células de hepatoma humano Hep3B, la inducción por CAMP mediada por CRE-170 depende además del CCAAT-150,indicando que la interacción molecular entre los factores que reconocen a ambos sitios es funcional para la respuesta a CAMP. Si el único sitio involucrado en la inducción por CAMPfuera la región CRE-CCAAT, se esperaría que la doble mutación en estos elementos eliminase totalmente la activación del promotor mediada por CAMP.Sin embargo, existe una activación remanente que podría deberse a la presencia de otro sitio de respuesta a CAMP situado río abajo de -150, o bien a un posicionamiento residual de factores sobre estos elementos. El objetivo principal de este trabajo consistió en construir un plásmido que sólo poseyera las 125 pb proximales (eliminando así los sitios CRE y CCAAT) del promotor de FN, ubicadas río arriba del un gen reporter CAT (construcción denominada p125-CAT) y estudiar, mediante experimentos de transfección, cuál de las hipótesis alternativas antes mencionadas se correspondía con la realidad. Se demuestra en este trabajo que el p125-CAT se estimula por la Vía de PKA, por lo que se descarta la hipótesis de un posicionamiento residual de factores sobre la región CRE-CCAAT como responsable de dicha activación. Por lo tanto, existe un sitio de respuesta a CAMPen el p125-CAT, que probablemente sea la región AP-2, ubicada justamente río abajo de -150,en la posición -57. El p125-CAT se activa por CAMP tanto en la línea Hep3B como en la línea HepG2 que, se sabe, carece del factor AP-2. Mediante experimentos de retardo en geles de poliacrilamida (gel shift), se vio que la línea celular Hep3B posee una gran cantidad del factor AP-2, mientras que la línea HepG2, posee una mínima cantidad del mismo. Se muestra también que el factor Sp-1 es capaz de unir un oligonucleótido que posee la secuencia AP-2 de FN, pero, a diferencia del factor AP-2, no existe evidencia publicada que indique que este factor sea activable por la Víadel CAMP. Por lo tanto, se concluye que es posible que el factor AP-2 sea el responsable de la activación remanente no debida a la región CRE-CCAAT en las células Hep3B. En el caso de la línea celular HepG2, la activación podría deberse a la unión de otros factores, como Sp-l.
Citación:
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Nogués, Guadalupe. (1999). Estudio de las secuencias del promotor de la fibronectina humana que median la activación por AMP cíclico. (Tesis de Grado. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO000627_Nogues
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Nogués, Guadalupe. "Estudio de las secuencias del promotor de la fibronectina humana que median la activación por AMP cíclico". Tesis de Grado, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 1999.https://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO000627_Nogues
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