Registro:
| Documento: | Tesis de Grado |
| Título: | Compuestos naturales como inhibidores de virus de importancia veterinaria |
| Autor: | Mafut, Alejandro Gabriel |
| Editor: | Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |
| Lugar de trabajo: | Universidad de Buenos Aires - CONICET. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales (IQUIBICEN)
|
| Publicación en la web: | 2026-07-08 |
| Fecha de defensa: | 2025-11-25 |
| Fecha en portada: | Noviembre de 2025 |
| Grado Obtenido: | Grado |
| Título Obtenido: | Licenciado en Ciencias Biológicas |
| Departamento Docente: | Departamento de Química Biológica |
| Director: | García, Cybele Carina |
| Director Asistente: | Gallo Calderón, Marina |
| Jurado: | Alvarez, Cora Lilia; Petrera, Erina; Tribelli, Paula María |
| Idioma: | Español |
| Formato: | PDF |
| Handle: |
https://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO001864_Mafut |
| PDF: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/seminario/seminario_nBIO001864_Mafut.pdf |
| Registro: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/seminario/document/seminario_nBIO001864_Mafut |
| Ubicación: | BIO 001864 |
| Derechos de Acceso: | Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Mafut, Alejandro Gabriel. (2025). Compuestos naturales como inhibidores de virus de importancia veterinaria. (Tesis de Grado. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO001864_Mafut |
Resumen:
El cannabidiol (CBD) es uno de los principales cannabinoides de la planta Cannabis sativa y ha ganado relevancia en los últimos años debido a su rol antiinflamatorio, anticonvulsivo y sus propiedades antioxidantes, así como también debido a su rol como potencial antiviral de amplio espectro, demostrando su eficacia in vitro frente a diversos virus patógenos humanos. Además, esta molécula es un antioxidante lipofílico, por lo que su sitio de acción principal son las membranas biológicas, donde puede acumularse y protegerla del daño, así como también afectar negativamente la formación de sincicios. El virus del moquillo canino o canine distemper virus (CDV) pertenece al género Morbillivirus, junto con el virus del sarampión humano, y es responsable de una enfermedad multisistémica que afecta principalmente a perros, zorros y mapaches, que, durante la última década, aumentó su incidencia incluso en poblaciones vacunadas, registrando también saltos interespecie en monos Rhesus. El CDV es reconocido por la molécula de activación de linfocitos T (CD150) y por el receptor nectina-4 en neuronas y células epiteliales, que participan en la formación de sincicios en células infectadas. En este estudio, se evaluó in vitro la acción antiviral de dos formulaciones de CBD: una comercial (CBD#1) y otra proveniente de la Universidad de Mar del Plata (CBD#2) frente al CDV. Se utilizó la línea celular Vero, cultivada en medio mínimo esencial con 5% de suero fetal bovino a 37°C en atmósfera con 5% de CO2 . Los stocks virales se prepararon en botellas de cultivo T25 con un inóculo de 300 μl de CDV incubado en estufa con CO2 a 37°C durante 60 minutos, para permitir su adsorción. Luego, se añadieron 6 ml de MEM 1,5% y se volvió a incubar en las mismas condiciones por 48 horas, para finalmente obtener 6 ml de stock viral. Con esta cosecha se realizaron infecciones en placas de 24 pocillos con 100 μl de CDV y se aplicaron por separado ambas formulaciones de CBD en una curva de concentraciones desde 60 a 1,875 μM. Transcurridas las 72 h post infección, se determinó la protección por observación minuciosa de la morfología del cultivo celular, comparando contra el control celular (CC) y el control viral (CV). Se observó un efecto protector sin efecto citotóxico en las células, para las concentraciones de CBD#1 60 μM y 30 μM así como también en las concentraciones 15 μM y 7,5 μM de CBD#2. Además, se realizó un ensayo de inhibición por plaqueo directo, que permitió registrar diferencias globales significativas para CBD#1 30 μM, CBD#1 60 μM y CBD#2 15 μM (p < 0,05). Pudimos confirmar que el momento de aplicación del tratamiento (pre, durante y post-infección) influye en la inhibición, observándose una tendencia de menor inhibición durante el tratamiento post-infección. Respecto a la formación de sincicios, para el tratamiento con CBD#1 60 μM se contabilizaron menos de 100 sincicios con un tamaño promedio de (6185,63 ± 776,89) px 2, mientras que para el control viral se registraron cerca de 400 con un tamaño promedio de (32102,80 ± 9547,87) px 2. Tanto el tamaño promedio como la cantidad de sincicios disminuyeron de manera significativa (p < 0,01 y p < 0,05 respectivamente) frente al control viral. Las inmunofluorescencias revelaron un cambio en la morfología de las células infectadas, siendo casi completamente esféricas. Asimismo, se observó una mayor fluorescencia en estas células respecto al CC y a las células infectadas que recibieron tratamiento con CBD. De manera novedosa, pudimos determinar que el CBD afecta la formación de sincicios por parte del CDV. Los resultados obtenidos en este trabajo sugieren que ambas formulaciones de CBD podrían tener perspectivas como molécula antiviral para el tratamiento de la infección por parte del virus del moquillo canino.
Abstract:
Cannabidiol (CBD) is one of the main cannabinoids in the Cannabis sativa plant and has gained relevance in recent years due to its anti-inflammatory, anticonvulsant, and antioxidant properties, as well as its potential as a broad-spectrum antiviral, demonstrating its efficacy in vitro against various human pathogenic viruses. Furthermore, this molecule is a lipophilic antioxidant, meaning its primary site of action is biological membranes, where it can accumulate and protect them from damage, while also negatively affecting syncytium formation. Canine distemper virus (CDV) belongs to the genus Morbillivirus, along with the human measles virus, and is responsible for a multisystemic disease that primarily affects dogs, foxes, and raccoons. Over the last decade, its incidence has increased even invaccinated populations, and interspecies transmission has also been observed in rhesus monkeys. CDV is recognized by the T-cell activation molecule CD150 and by the nectin-4 receptor on neurons and epithelial cells, which participate in syncytium formation in infected cells. In this study, the antiviral activity of two CBD formulations against CDV was evaluated in vitro: one commercial (CBD#1) and another from the University of Mar del Plata (CBD#2). The Vero cell line was used, cultured in a minimal essential medium with 5% fetal bovine serum at 37°C in a 5% CO2 atmosphere. Viral stocks were prepared in T25 culture bottles with a 300 μl inoculum of CDV incubated in a CO2 incubator at 37°C for 60 minutes to allow adsorption. Next, 6 ml of 1.5% MEM were added, and the mixture was incubated again under the same conditions for 48 hours, resulting in 6 ml of viral stock. This viral stock was then used to infect 24-well plates with 100 μL of CDV, and both CBD formulations were applied separately in a concentration curve from 60 to 1,875 μM. After 72 hours post-infection, protection was determined by careful observation of cell culture morphology, comparing it against the cell control (CC) and the viral control (CV). A protective effect without cytotoxicity was observed in the cells for CBD#1 concentrations of 60 μM and 30 μM, as well as for CBD#2 concentrations of 15 μM and 7.5 μM. Furthermore, a direct plaque inhibition assay was performed, which revealed significant overall differences for CBD#1 30 μM, CBD#1 60 μM, and CBD#2 15 μM (p < 0.05). We were able to confirm that the timing of treatment application (pre-, during, and post-infection) influences inhibition, with a trend toward lower inhibition during post-infection treatment. Regarding syncytium formation, fewer than 100 syncytia were counted for the CBD#1 60 μM treatment, with an average size of (6185.63 ± 776.89) px2, while approximately 400 syncytia were recorded for the viral control, with an average size of (32102.80 ± 9547.87) px2. Both the average size and number of syncytia decreased significantly (p < 0.01 and p < 0.05, respectively) compared to the viral control. Immunofluorescence revealed a change in the morphology of the infected cells, which became almost completely spherical. Furthermore, these cells exhibited greater fluorescence compared to the control group and to infected cells treated with CBD. Novelally, we were able to determine that CBD affects syncytium formation by the canine distemper virus (CDV). The results obtained in this study suggest that both CBD formulations could have potential as antiviral molecules for the treatment of canine distemper virus infection.
Citación:
---------- APA ----------
Mafut, Alejandro Gabriel. (2025). Compuestos naturales como inhibidores de virus de importancia veterinaria. (Tesis de Grado. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO001864_Mafut
---------- CHICAGO ----------
Mafut, Alejandro Gabriel. "Compuestos naturales como inhibidores de virus de importancia veterinaria". Tesis de Grado, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 2025.https://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO001864_Mafut
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