Registro:
| Documento: | Tesis de Grado |
| Título: | Rol de los inositol fosfatos en el remodelado de la cromatina del promotor TPK1 de Saccharomyces cerevisiae |
| Título alternativo: | Role of inositol phosphates in chromatin remodeling of the TPK1 promoter in Saccharomyces cerevisiae |
| Autor: | Jaraslasky, Iván |
| Editor: | Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |
| Publicación en la web: | 2026-07-08 |
| Fecha de defensa: | 2025-30-10 |
| Fecha en portada: | Octubre, 2025 |
| Grado Obtenido: | Grado |
| Título Obtenido: | Licenciado en Ciencias Biológicas |
| Departamento Docente: | Departamento de Química Biológica |
| Director: | Galello, Fiorella Ariadna |
| Idioma: | Español |
| Formato: | PDF |
| Handle: |
https://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO001859_Jaraslasky |
| PDF: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/seminario/seminario_nBIO001859_Jaraslasky.pdf |
| Registro: | https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/collection/seminario/document/seminario_nBIO001859_Jaraslasky |
| Ubicación: | BIO 001859 |
| Derechos de Acceso: | Esta obra puede ser leída, grabada y utilizada con fines de estudio, investigación y docencia. Es necesario el reconocimiento de autoría mediante la cita correspondiente. Jaraslasky, Iván. (2025). Rol de los inositol fosfatos en el remodelado de la cromatina del promotor TPK1 de Saccharomyces cerevisiae. (Tesis de Grado. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO001859_Jaraslasky |
Resumen:
Las levaduras son constantemente desafiadas por los cambios en las condiciones ambientales. Saccharomyces cerevisiae utiliza diferentes mecanismos celulares para adaptarse rápidamente a estos cambios. Uno de ellos es la reorganización de los patrones de expresión, donde la remodelación de la cromatina es crucial. La proteína quinasa A dependiente de AMPc (PKA) de S. cerevisiae controla una amplia variedad de procesos biológicos y funciones celulares en respuesta a los cambios ambientales. La PKA de levaduras está compuesta por dos subunidades catalíticas codificadas por los genes TPK1, TPK2 y TPK3, y un dímero de subunidades regulatorias codificadas por el gen BCY1. Trabajos previos de nuestro laboratorio indican que, ante el estrés térmico, solo la actividad del promotor de TPK1 está regulada positivamente y los niveles de ARNm de TPK1 aumentan. Además, demostramos que el promotor de TPK1 posee tres nucleosomas posicionados que son desplazados en respuesta al estrés térmico, y que esta remodelación de la cromatina es dependiente del complejo SWI/SNF. A partir de un abordaje de R-SGA (Reporter-Synthetic Genetic Array) identificamos nuevos reguladores transcripcionales de cada una de las subunidades de PKA. El análisis de GO de los reguladores identificados mostró un enriquecimiento en la categoría “Reguladores Transcripcionales” y en las categorías “Metabolismo de lípidos” y “Metabolismo de fosfatos”. Hemos demostrado que la actividad de los promotores de las TPKs y los niveles de ARNm aumentan en presencia de inositol. Por otro lado, se ha demostrado que la vía de los inositol polifosfatos juega un papel importante en la respuesta al estrés y modula las funciones de varios complejos de remodelación de la cromatina. El objetivo de este trabajo es profundizar el conocimiento con respecto al rol de la vía de los inositol polifosfatos en la regulación de la expresión de las subunidades de PKA de levaduras en condiciones de estrés térmico. En primer lugar, utilizando ensayos de gen reportero y RT-qPCR, evaluamos las actividades de los promotores de TPKs y los niveles de ARNm en distintas cepas mutantes para la vía de los inositol polifosfatos. Observamos que, en comparación con la cepa salvaje, ni la actividad del promotor de TPK1 ni los niveles de ARNm se incrementan en respuesta al estrés térmico en las cepas plc1, ipk2 y kcs1. Las actividades de los promotores y los niveles de ARNm de TPK2 y TPK3 no presentan cambios en las cepas mutantes evaluadas, lo que indica que el efecto de la vía de los inositol polifosfatos es específico para el promotor de TPK1. Por otro lado, no se observan diferencias significativas en los niveles de la proteína Tpk1 en respuesta al estrés térmico en ninguna de las mutantes ensayadas. También evaluamos el reclutamiento del complejo SWI/SNF al promotor de TPK1 en las cepas ipk2 SNF2-TAP, ipk1 SNF2-TAP y kcs1 SNF2-TAP mediante el ensayo de ChIP-qPCR. Nuestros resultados indican que las enzimas Ipk2 y Kcs1, pero no Ipk1, son 2 necesarias para el reclutamiento de Snf2-TAP al promotor de TPK1 en condiciones de estrés térmico. En conjunto, estos resultados indican que la vía de los inositol fosfatos está involucrada en la regulación transcripcional de TPK1 durante el estrés térmico.
Abstract:
Yeasts are constantly challenged by changes in environmental conditions. Saccharomyces cerevisiae uses different cellular mechanisms to adapt rapidly to these changes. One of them is the reorganization of expression patterns, where chromatin remodeling is essential. c-AMP dependent Protein kinase A (PKA) from S. cerevisiae controls a wide variety of biological processes and cellular functions in response to environmental changes. Yeast PKA is composed of two catalytic subunits encoded by TPK1, TPK2 and TPK3 genes, and a dimer of regulatory subunits encoded by BCY1 gene. Previous research from our laboratory indicates that, upon heat stress, only TPK1 promoter activity is upregulated and TPK1 mRNA levels increase. Furthermore, we demonstrated that the TPK1 promoter has three positioned nucleosomes that are evicted in response to heat stress, and this chromatin remodeling is SWI/SNF dependent. From an R-SGA (Reporter-Synthetic Genetic Array) approach, we identified new transcriptional regulators of each of the PKA subunits. GO analysis of the identified regulators showed an enrichment in the Transcriptional Regulators category and in the Lipid Metabolism and Phosphate Metabolism categories. We have shown that the activity of the TPKs promoters and the mRNA levels increase in the presence of inositol. Furthermore, it has been shown that the inositol polyphosphate pathway plays an important role in the stress response and modulates the functions of various chromatin remodeling complexes. The purpose of this work is to obtain further knowledge in regards to the role of the inositol polyphosphate pathway on the expression regulation of yeast PKA subunits under heat stress conditions. Firstly, we evaluated TPKs promoter activities and mRNA levels in different null mutant strains for the inositol polyphosphate pathway using reporter gene assays and qRT-PCR. We observed that, in comparison with wild type strain, neitherTPK1 promoter activity nor mRNA levels increased in response to heat stress in the plc1, ipk2 and kcs1 strains. TPK2 and TPK3 promoter activities and mRNA levels remained unchanged in the null mutant strains, indicating that the effect of the inositol polyphosphate pathway is specific to the TPK1 promoter. No significant differences in Tpk1 protein levels were observed in response to heat stress in any of the mutants tested. We also evaluated the recruitment of SWI/SNF complex to the TPK1 promoter in the SNF2-TAP ipk2, SNF2-TAP ipk1 and SNF2-TAP kcs1 strain using ChIP4 qPCR assay. Our results show that Ipk2 and Kcs1, but not Ipk1, are required for the recruitment of SNF2-TAP to the TPK1 promoter under heat stress conditions. Taken together, these results indicate that the inositol phosphate pathway is involved in the transcriptional regulation of TPK1 during heat stress.
Citación:
---------- APA ----------
Jaraslasky, Iván. (2025). Rol de los inositol fosfatos en el remodelado de la cromatina del promotor TPK1 de Saccharomyces cerevisiae. (Tesis de Grado. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales.). Recuperado de https://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO001859_Jaraslasky
---------- CHICAGO ----------
Jaraslasky, Iván. "Rol de los inositol fosfatos en el remodelado de la cromatina del promotor TPK1 de Saccharomyces cerevisiae". Tesis de Grado, Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, 2025.https://hdl.handle.net/20.500.12110/seminario_nBIO001859_Jaraslasky
Estadísticas:
Descargas mensuales
Total de descargas desde :
https://bibliotecadigital.exactas.uba.ar/download/seminario/seminario_nBIO001859_Jaraslasky.pdf
Distrubución geográfica
